| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩写词 | 第18-19页 |
| 1 绪论 | 第19-41页 |
| 1.1 淀粉 | 第19-21页 |
| 1.2 淀粉酶 | 第21-35页 |
| 1.2.1 淀粉酶分类 | 第21-23页 |
| 1.2.2 α-淀粉酶 | 第23-28页 |
| 1.2.3 适冷α-淀粉酶 | 第28-35页 |
| 1.3 淀粉分支酶 | 第35-36页 |
| 1.3.1 淀粉分支酶的结构与催化机制 | 第35-36页 |
| 1.4 海洋适冷α-淀粉酶的研究进展 | 第36-39页 |
| 1.4.1 海洋微生物资源的研究进展 | 第36-37页 |
| 1.4.2 海洋产淀粉酶微生物研究现状 | 第37-38页 |
| 1.4.3 海洋适冷α-淀粉酶的研究现状 | 第38-39页 |
| 1.5 本论文的研究思路 | 第39-41页 |
| 2 海洋适冷α-淀粉酶菌株筛选与鉴定 | 第41-51页 |
| 2.1 引言 | 第41页 |
| 2.2 材料与方法 | 第41-44页 |
| 2.2.1 样品来源 | 第41页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第41页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第41-42页 |
| 2.2.4 培养基 | 第42页 |
| 2.2.5 产酶菌株的筛选 | 第42-43页 |
| 2.2.6 粗酶液制备方法 | 第43页 |
| 2.2.7 酶活测定方法 | 第43页 |
| 2.2.8 产酶菌株的鉴定 | 第43-44页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第44-49页 |
| 2.3.1 产酶菌株的筛选结果 | 第44-45页 |
| 2.3.2 菌落及菌株形态观察 | 第45-46页 |
| 2.3.3 菌株生理生化特征 | 第46页 |
| 2.3.4 16S rRNA序列分析与系统发育树构建 | 第46-48页 |
| 2.3.5 dsh19-1脂肪酸含量鉴定 | 第48-49页 |
| 2.4 小结 | 第49-51页 |
| 3 Bacillus sp.dsh19-1发酵过程优化及适冷α-淀粉酶酶学性质表征 | 第51-75页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 材料与方法 | 第51-56页 |
| 3.2.1 菌株 | 第51-52页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第52页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第52页 |
| 3.2.4 培养基及培养方法 | 第52页 |
| 3.2.5 适冷α-淀粉酶粗酶液制备 | 第52页 |
| 3.2.6 适冷α-淀粉酶活测定方法 | 第52-53页 |
| 3.2.7 发酵过程优化 | 第53-54页 |
| 3.2.8 酶分离纯化 | 第54-55页 |
| 3.2.9 酶学性质表征 | 第55-56页 |
| 3.2.10 数据统计方法 | 第56页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第56-74页 |
| 3.3.1 培养基优化 | 第56-65页 |
| 3.3.2 发酵条件优化 | 第65-69页 |
| 3.3.3 AmyD分离纯化 | 第69-71页 |
| 3.3.4 AmyD酶学性质表征 | 第71-74页 |
| 3.4 小结 | 第74-75页 |
| 4 适冷α-淀粉酶Amy基因克隆、表达及酶学性质分析 | 第75-104页 |
| 4.1 引言 | 第75页 |
| 4.2 材料与方法 | 第75-83页 |
| 4.2.1 菌株 | 第75页 |
| 4.2.2 质粒 | 第75-76页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第76-77页 |
| 4.2.4 实验仪器 | 第77页 |
| 4.2.5 培养基 | 第77页 |
| 4.2.6 Amy基因克隆 | 第77-79页 |
| 4.2.7 Amy基因序列分析 | 第79页 |
| 4.2.8 Amy基因表达质粒构建 | 第79-80页 |
| 4.2.9 重组蛋白AmyD-1的诱导表达 | 第80-81页 |
| 4.2.10 AmyD-1纯化 | 第81页 |
| 4.2.11 SDS-PAGE电泳检测 | 第81页 |
| 4.2.12 AmyD-1酶学性质研究 | 第81-82页 |
| 4.2.13 底物特异性和酶动力学参数测定 | 第82页 |
| 4.2.14 AmyD-1降解产物分析 | 第82页 |
| 4.2.15 AmyD-1同源模建 | 第82-83页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第83-103页 |
| 4.3.1 Amy基因全序列克隆 | 第83页 |
| 4.3.2 Amy基因序列分析 | 第83-89页 |
| 4.3.3 Amy基因表达质粒构建 | 第89页 |
| 4.3.4 Amy在大肠杆菌内的重组表达 | 第89-90页 |
| 4.3.5 AmyD-1的TALON树脂亲和纯化 | 第90-91页 |
| 4.3.6 AmyD-1酶学性质研究 | 第91-96页 |
| 4.3.7 底物特异性和酶动力学参数测定 | 第96-97页 |
| 4.3.8 AmyD-1降解产物分析 | 第97页 |
| 4.3.9 AmyD-1同源建模 | 第97-101页 |
| 4.3.10 活性位点分析及分子对接 | 第101-103页 |
| 4.4 小结 | 第103-104页 |
| 5 淀粉分支酶基因的克隆与表达 | 第104-119页 |
| 5.1 引言 | 第104页 |
| 5.2 材料与方法 | 第104-108页 |
| 5.2.1 菌株 | 第104-105页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第105页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第105页 |
| 5.2.4 培养基 | 第105页 |
| 5.2.5 质粒 | 第105-106页 |
| 5.2.6 淀粉分支酶基因Sbe克隆 | 第106页 |
| 5.2.7 Sbe基因序列分析 | 第106页 |
| 5.2.8 淀粉分支酶基因Sbe表达质粒构建 | 第106-107页 |
| 5.2.9 重组蛋白诱导表达 | 第107页 |
| 5.2.10 同源模建 | 第107-108页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第108-117页 |
| 5.3.1 淀粉分支酶基因Sbe全序列克隆 | 第108页 |
| 5.3.2 淀粉分支酶的基因序列的生物信息学分析 | 第108-114页 |
| 5.3.3 淀粉分支酶基因表达质粒构建 | 第114页 |
| 5.3.4 Sbe基因大肠杆菌异源表达 | 第114-115页 |
| 5.3.5 淀粉分支酶同源模建 | 第115页 |
| 5.3.6 淀粉分支酶同源建模分析 | 第115-117页 |
| 5.4 本章小结 | 第117-119页 |
| 6 总结与展望 | 第119-121页 |
| 参考文献 | 第121-133页 |
| 附录A Bacillus sp. dsh19-1的16S rRNA序列 | 第133-134页 |
| 附录B 适冷α-淀粉酶Amy序列 | 第134-136页 |
| 附录C 淀粉分支酶Sbe序列 | 第136-138页 |
| 致谢 | 第138-139页 |
| 作者简介 | 第139-140页 |
