| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一部分 绪论 | 第13-28页 |
| 1 文献综述 | 第13-19页 |
| 1.1 立题背景与意义 | 第13-14页 |
| 1.2 肠炎沙门氏菌的概述 | 第14页 |
| 1.3 肠炎沙门氏菌与人类健康 | 第14-15页 |
| 1.4 动物产品沙门氏菌的污染情况 | 第15页 |
| 1.5 计量的概述 | 第15-18页 |
| 1.5.1 生物计量的简介及意义 | 第16页 |
| 1.5.2 标准物质(reference material,RM) | 第16-18页 |
| 1.6 生物标准物质简介 | 第18页 |
| 1.7 生物标准物质的现状和发展 | 第18-19页 |
| 2 研究内容及方法 | 第19-28页 |
| 2.1 研制肠炎沙门氏菌菌体标准物质概述 | 第20-25页 |
| 2.1.1 菌体标准物质的保存方法 | 第20-23页 |
| 2.1.2 鸡肉基质灭菌方式的选择 | 第23-25页 |
| 2.2 核酸标准物质的研制概述 | 第25-28页 |
| 2.2.1 基因组DNA提取方法的介绍 | 第25页 |
| 2.2.2 核酸标准物质的浓度测定 | 第25-26页 |
| 2.2.3 核酸标准物质纯度的初判断 | 第26页 |
| 2.2.4 检测标准物质gDNA的完整性 | 第26页 |
| 2.2.5 肠炎沙门氏菌的gDNA特征验证 | 第26-27页 |
| 2.2.6 核酸标准物质的保存 | 第27-28页 |
| 第二部分 试验研究 | 第28-93页 |
| 试验一 含鸡肉基质的肠炎沙门氏菌菌体标准物质的制备 | 第28-65页 |
| 1 试验材料 | 第28-29页 |
| 1.1 仪器与设备 | 第28-29页 |
| 1.2 试验菌种与试剂 | 第29页 |
| 2 溶液、培养基的配置 | 第29-31页 |
| 3 菌种的制备 | 第31页 |
| 3.1 菌种的复苏 | 第31页 |
| 3.2 菌种的保存 | 第31页 |
| 3.3 菌种的培养方法 | 第31页 |
| 4 肠炎沙门氏菌生长曲线及浓度标准曲线的绘制 | 第31-32页 |
| 5 鸡肉前处理 | 第32-34页 |
| 5.1 制备鸡肉糜 | 第32-33页 |
| 5.2 药物残留检测-抗生素四大类 | 第33页 |
| 5.3 鸡肉灭菌 | 第33页 |
| 5.4 鸡肉基质对肠炎沙门氏菌的生长是否有影响 | 第33-34页 |
| 5.5 鸡肉脱水性试验 | 第34页 |
| 6 保护剂的筛选试验 | 第34-37页 |
| 6.1保护剂单剂的蹄选 | 第34-36页 |
| 6.3 配方保护剂的设计 | 第36页 |
| 6.4 对比不同配方的保护效果 | 第36-37页 |
| 7 预冻方法的选择 | 第37页 |
| 7.1 预冻试验设计 | 第37页 |
| 7.2 预冻试验操作步骤 | 第37页 |
| 8 菌种初始添加浓度的确定及标准物质的定值 | 第37-42页 |
| 8.1 菌种添加浓度的确定 | 第37-42页 |
| 8.2 冻干样品定值的方法 | 第42页 |
| 9 批量制备标准物质 | 第42页 |
| 10 标准物质验证 | 第42-45页 |
| 10.1 均匀性试验 | 第42-43页 |
| 10.2 稳定性试验 | 第43页 |
| 10.3 不确定度评估方法 | 第43-45页 |
| 11 结果 | 第45-65页 |
| 11.1 肠炎沙门氏菌生长曲线及浓度标准曲线的绘制 | 第45-47页 |
| 11.2 药物残留检测 | 第47-48页 |
| 11.3 鸡肉对肠炎沙门氏菌生长的影响 | 第48-49页 |
| 11.4 鸡肉的脱水性试验 | 第49-50页 |
| 11.5 保护剂选择 | 第50-53页 |
| 11.6 阶段预冻的时间选择的结果 | 第53-54页 |
| 11.7 菌种浓度添加结果 | 第54-55页 |
| 11.8 均匀性及稳定性试验结果 | 第55-58页 |
| 11.9 不确定度评估结果 | 第58-65页 |
| 试验二 肠炎沙门氏菌gDNA标准物质的研制 | 第65-93页 |
| 1 试验材料 | 第65-66页 |
| 1.1 仪器与设备 | 第65-66页 |
| 1.2 试剂 | 第66页 |
| 2 gDNA提取 | 第66-67页 |
| 2.1 菌液的培养 | 第66页 |
| 2.2 gDNA提取方法 | 第66-67页 |
| 3 gDNA浓度的测定 | 第67-68页 |
| 4 对提取的gDNA进行纯度初检测 | 第68-69页 |
| 5 提取的总gDNA完整性检测 | 第69-70页 |
| 6 提取的总gDNA特征性验证 | 第70-72页 |
| 6.1 利用PCR技术扩增invA基因 | 第70-71页 |
| 6.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第71页 |
| 6.3 PCR产物的纯化回收、测序 | 第71-72页 |
| 7 制备肠炎沙门氏菌gDNA标准物质 | 第72-74页 |
| 7.1 均匀性测定 | 第73页 |
| 7.2 稳定性测定 | 第73页 |
| 7.3 测量不确定度评估 | 第73-74页 |
| 8 结果 | 第74-93页 |
| 8.1 总gDNA浓度及纯度检测结果 | 第74-75页 |
| 8.2 总gDNA的完整性 | 第75-76页 |
| 8.3 总gDNA特征性验证结果 | 第76页 |
| 8.4 測序结果 | 第76-77页 |
| 8.5 制备肠炎沙门氏菌gDNA标准物质 | 第77页 |
| 8.6 gDNA标准物质的验证 | 第77-93页 |
| 8.6.1 标准物质gDNA含量的均匀性分析结果 | 第78页 |
| 8.6.2 标准物质gDNA完整性 | 第78-79页 |
| 8.6.3 标准物质的gDNA特征性检验 | 第79页 |
| 8.6.4 稳定性试验 | 第79-90页 |
| 8.6.5 不确定度评估 | 第90-93页 |
| 第三部分 结论 | 第93-100页 |
| 1 试验一结果讨论 | 第93-95页 |
| 1.1 保护剂的选择 | 第93页 |
| 1.2 降低冷冻干燥过程中菌株的损伤率/死亡率 | 第93-94页 |
| 1.3 鸡肉基质对菌种标准物质的影响 | 第94-95页 |
| 1.4 标准物质的不确定度评定 | 第95页 |
| 2 试验二结果讨论 | 第95-100页 |
| 2.1 gDNA的提取 | 第95-96页 |
| 2.2 gDNA标准物质的验证 | 第96-100页 |
| 第五部分 展望 | 第100-102页 |
| 1 对本研究的展望 | 第100页 |
| 2 对我国生物标准物质研制的展望 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 作者简历 | 第108页 |
