| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-31页 |
| 1.1 立题背景和意义 | 第11-13页 |
| 1.2 食品中四种致病菌的生物学性状及其危害 | 第13-17页 |
| 1.2.1 鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhimurium) | 第13-14页 |
| 1.2.2 弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii) | 第14-15页 |
| 1.2.3 奇异变形杆菌(Proteus mirabilis) | 第15-16页 |
| 1.2.4 迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda) | 第16-17页 |
| 1.3 检测方法介绍 | 第17-29页 |
| 1.3.1 传统检测方法 | 第18-20页 |
| 1.3.2 微生物分离和浓缩技术 | 第20-21页 |
| 1.3.3 快速及自动化检测法 | 第21-29页 |
| 1.4 本研究中的分子生物学靶点 | 第29-30页 |
| 1.4.1 鼠伤寒沙门氏菌fimY基因 | 第29-30页 |
| 1.4.2 弗氏柠檬酸杆菌ldh基因 | 第30页 |
| 1.4.3 奇异变形杆菌idsC基因 | 第30页 |
| 1.4.4 迟缓爱德华氏菌fimA基因 | 第30页 |
| 1.5 本研究的目的和任务 | 第30-31页 |
| 第二章 食品中四种致病菌的单重PCR检测方法的建立 | 第31-44页 |
| 2.1 试验材料 | 第31-33页 |
| 2.1.1 试验菌株 | 第31页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.3 试验仪器设备 | 第32-33页 |
| 2.2 试验方法 | 第33-35页 |
| 2.2.1 模板DNA提取 | 第33-34页 |
| 2.2.2 靶标菌特异引物的设计 | 第34页 |
| 2.2.3 单重PCR反应体系的建立 | 第34-35页 |
| 2.2.4 单重PCR特异性试验 | 第35页 |
| 2.2.5 单重PCR灵敏度试验 | 第35页 |
| 2.3 试验结果 | 第35-42页 |
| 2.3.1 三种方法提取DNA效果比较 | 第35-36页 |
| 2.3.2 单重PCR反应体系的建立 | 第36-37页 |
| 2.3.3 单重PCR特异性试验结果 | 第37-40页 |
| 2.3.4 单重PCR灵敏度试验结果 | 第40-42页 |
| 2.4 讨论 | 第42-44页 |
| 2.4.1 靶标菌DNA提取方法的选择 | 第42-43页 |
| 2.4.2 单重PCR特异性和敏感性 | 第43-44页 |
| 第三章 食品中四种致病菌的多重PCR检测方法的建立 | 第44-58页 |
| 3.1 试验材料 | 第44-45页 |
| 3.1.1 试验菌株 | 第44页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第44-45页 |
| 3.1.3 试验仪器设备 | 第45页 |
| 3.2 试验方法 | 第45-47页 |
| 3.2.1 模板DNA提取方法 | 第45-46页 |
| 3.2.2 多重PCR引物的设计与合成 | 第46页 |
| 3.2.3 多重PCR反应条件优化 | 第46-47页 |
| 3.2.4 多重PCR反应敏感度试验 | 第47页 |
| 3.2.5 多重PCR反应特异性试验 | 第47页 |
| 3.2.6 人工染菌试验 | 第47页 |
| 3.3 试验结果 | 第47-53页 |
| 3.3.1 多重PCR检测方法的建立 | 第47-48页 |
| 3.3.2 多重PCR反应体系的优化 | 第48-50页 |
| 3.3.3 多重PCR反应体系的特异性试验 | 第50-51页 |
| 3.3.4 多重PCR反应体系的灵敏度试验 | 第51-52页 |
| 3.3.5 人工染菌试验 | 第52-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-58页 |
| 3.4.1 多重PCR影响因素 | 第53-55页 |
| 3.4.2 多重PCR灵敏度 | 第55页 |
| 3.4.3 多重PCR特异性 | 第55-56页 |
| 3.4.5 多重PCR稳定性 | 第56页 |
| 3.4.6 多重PCR体系的体积 | 第56页 |
| 3.4.7 PCR增效剂的使用 | 第56-57页 |
| 3.4.8 核酸染料的选择 | 第57-58页 |
| 第四章 应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪对食品中四种致病菌的快速检测法 | 第58-62页 |
| 4.1 试验材料 | 第58-59页 |
| 4.1.1 试验菌株 | 第58页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第58页 |
| 4.1.3 试验仪器设备 | 第58-59页 |
| 4.2 试验步骤 | 第59-60页 |
| 4.2.1 细菌样品前处理 | 第59页 |
| 4.2.2 开机 | 第59-60页 |
| 4.2.3 采集数据 | 第60页 |
| 4.3 试验结果 | 第60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 附录1 部分英文缩写一览表 | 第70页 |
| 附录2 单位 | 第70-71页 |
| 附录3 核酸提取试剂盒法 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
