| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 缩略词注释表 | 第7-8页 |
| 1 绪论 | 第8-18页 |
| 1.1 反 10，顺 12-共轭亚油酸生物合成研究进展 | 第8-9页 |
| 1.2 解脂耶氏酵母脂质代谢调控研究进展 | 第9-15页 |
| 1.2.1 解脂耶氏酵母的特性 | 第9页 |
| 1.2.2 解脂耶氏酵母碳源利用 | 第9-10页 |
| 1.2.3 解脂耶氏酵母脂质合成代谢研究进展 | 第10-12页 |
| 1.2.4 解脂耶氏酵母脂质分解代谢研究进展 | 第12-15页 |
| 1.3 解脂耶氏酵母基因工程操作系统 | 第15-16页 |
| 1.3.1 外源基因高效表达 | 第15页 |
| 1.3.2 基因敲除策略 | 第15-16页 |
| 1.4 本课题的立题意义和主要研究内容 | 第16-18页 |
| 1.4.1 来源及研究意义 | 第16-17页 |
| 1.4.2 主要研究内容 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 菌株 | 第18-19页 |
| 2.1.2 培养基配置 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试剂及设备 | 第19-20页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-25页 |
| 2.2.1 基因敲除质粒的构建及鉴定 | 第20-22页 |
| 2.2.2 单基因敲除菌株的构建及鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.3 双基因敲除菌株Polf-Δpox2Δpox3的构建及鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.4 PAI单拷贝和多拷贝重组菌株的构建及鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.5 重组菌株的培养方法 | 第25页 |
| 2.3 分析方法 | 第25-27页 |
| 2.3.1 生长曲线的测定 | 第25页 |
| 2.3.2 菌体无脂质生物量的测定 | 第25页 |
| 2.3.3 定量PCR分析 | 第25-26页 |
| 2.3.4 SDS-PAGE和Western Blot分析 | 第26页 |
| 2.3.5 脂肪酸分析 | 第26页 |
| 2.3.6 脂肪酸结合常数计算 | 第26-27页 |
| 3 结果与讨论 | 第27-49页 |
| 3.1 脂肪酸 β 氧化相关基因敲除菌的构建 | 第27-32页 |
| 3.1.1 基因敲除质粒的构建及鉴定 | 第27-28页 |
| 3.1.2 基因敲除重组菌株的构建及鉴定 | 第28-31页 |
| 3.1.3 PAI单拷贝整合菌株的构建及鉴定 | 第31-32页 |
| 3.2 脂肪酸 β 氧化相关基因敲除对t10,c12-CLA合成的影响 | 第32-42页 |
| 3.2.1 四种重组菌株生长特性的比较 | 第32-33页 |
| 3.2.2 四种重组菌株脂类碳源利用的比较 | 第33-38页 |
| 3.2.3 底物亚油酸添加时间和添加量的确定 | 第38-39页 |
| 3.2.4 四种重组菌株合成t10,c12-CLA比较分析 | 第39-42页 |
| 3.3 PEX10基因敲除结合PAI多拷贝整合的重组菌株合成t10,c12-CLA研究 | 第42-46页 |
| 3.3.1 PAI多拷贝整合菌株的构建及鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3.2 PAI多拷贝整合菌株拷贝数、表达量以及t10,c12-CLA产物分析 | 第43-44页 |
| 3.3.3 Polf-Δpex10/1292 opai-6 菌株生长特性分析 | 第44页 |
| 3.3.4 Polf-Δpex10/1292 opai-6 菌株合成t10,c12-CLA的分析 | 第44-46页 |
| 3.4 发酵罐水平补加挥发性脂肪酸时重组菌株合成t10,c12-CLA的分析 | 第46-49页 |
| 主要结论与展望 | 第49-51页 |
| 主要结论 | 第49-50页 |
| 展望 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第57页 |
