| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 乳酸菌的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.1.1 乳酸菌的基本特性 | 第11页 |
| 1.1.2 乳酸菌的益生性 | 第11-13页 |
| 1.1.3 乳酸菌的应用 | 第13页 |
| 1.2 乳酸菌S-层蛋白的研究进展 | 第13-16页 |
| 1.2.1 乳酸菌S-层蛋白的基本特征 | 第13-15页 |
| 1.2.2 乳酸菌S-层蛋白的分离纯化 | 第15页 |
| 1.2.3 乳酸菌S-层蛋白的功能 | 第15-16页 |
| 1.2.4 乳酸菌S-层蛋白的应用与发展趋势 | 第16页 |
| 1.3 基因工程表达系统和策略研究 | 第16-19页 |
| 1.3.1 质粒与菌株 | 第16-18页 |
| 1.3.2 基因表达策略 | 第18-19页 |
| 1.4 本课题研究意义、目的与研究内容 | 第19-20页 |
| 1.4.1 研究意义与目的 | 第19页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第19-20页 |
| 第2章 pET-28a-slpB重组质粒的构建及鉴定 | 第20-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 培养基及抗生素 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.4 主要仪器与设备 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1 嗜酸乳杆菌NCFM的培养 | 第22页 |
| 2.2.2 嗜酸乳杆菌NCFM全基因组的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.3 slpB基因PCR扩增及纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.4 重组质粒pMD19T(Simple)-slpB构建及鉴定 | 第24-27页 |
| 2.2.5 重组质粒pET-28a-slpB构建及鉴定 | 第27-29页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第29-34页 |
| 2.3.1 slpB基因的克隆 | 第29-30页 |
| 2.3.2 重组质粒pMD19T(Simple)-slpB的构建 | 第30-31页 |
| 2.3.3 重组质粒pMD19T(Simple)-slpB双酶切验证 | 第31-33页 |
| 2.3.4 重组质粒pET-28a-slpB的构建及鉴定 | 第33-34页 |
| 2.4 本章小结 | 第34-36页 |
| 第3章 融合蛋白His-slpB的表达优化及纯化 | 第36-48页 |
| 3.1 实验材料 | 第36-38页 |
| 3.1.1 菌株及质粒 | 第36页 |
| 3.1.2 培养基及抗生素 | 第36页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第36-37页 |
| 3.1.4 主要仪器与设备 | 第37-38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-41页 |
| 3.2.1 重组菌的诱导培养 | 第38-39页 |
| 3.2.2 重组菌表达条件的优化 | 第39-40页 |
| 3.2.3 融合蛋白His-slpB的纯化(镍琼脂糖亲和层析) | 第40页 |
| 3.2.4 融合蛋白His-slpB的Western-Blot鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.5 蛋白质浓度的测定-Bradford法[122] | 第41页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第41-47页 |
| 3.3.1 His-slpB融合蛋白的诱导表达 | 第41-42页 |
| 3.3.2 His-slpB融合蛋白表达条件的优化 | 第42-45页 |
| 3.3.3 His-slpB融合蛋白纯化 | 第45页 |
| 3.3.4 His-slpB融合蛋白的Western-Blot鉴定 | 第45-46页 |
| 3.3.5 His-slpB融合蛋白浓度的测定 | 第46-47页 |
| 3.4 本章小结 | 第47-48页 |
| 第4章 S-层蛋白结构与功能的初步研究 | 第48-65页 |
| 4.1 实验材料 | 第48-50页 |
| 4.1.1 菌株 | 第48页 |
| 4.1.2 培养基及抗生素 | 第48-49页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第49页 |
| 4.1.4 主要仪器与设备 | 第49-50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-53页 |
| 4.2.1 嗜酸乳杆菌NCFM S_A蛋白的提取及纯化 | 第50-51页 |
| 4.2.2 S-层蛋白二级结构的测定 | 第51页 |
| 4.2.3 S-层蛋白的胃肠道耐受性 | 第51页 |
| 4.2.4 S-层蛋白对微生物细胞的绑定作用 | 第51-52页 |
| 4.2.5 S-层蛋白对Caco-2细胞的粘附作用 | 第52-53页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第53-64页 |
| 4.3.1 SA蛋白的粗提取 | 第53-54页 |
| 4.3.2 SA蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| 4.3.3 表层蛋白的二级结构 | 第55-57页 |
| 4.3.4 S-层蛋白经模拟胃肠液处理后SDS-PAGE分析 | 第57-59页 |
| 4.3.5 S-层蛋白细胞绑定实验结果 | 第59-61页 |
| 4.3.6 蛋白修饰结果 | 第61-62页 |
| 4.3.7 酶标仪荧光测定结果 | 第62-63页 |
| 4.3.8 激光共聚焦成像结果 | 第63-64页 |
| 4.4 本章小结 | 第64-65页 |
| 第5章 全文结论 | 第65页 |
| 论文创新性 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
