| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-15页 |
| 1.1 食醋概述 | 第8-9页 |
| 1.1.1 食醋功能简介 | 第8页 |
| 1.1.2 食醋发酵工艺 | 第8-9页 |
| 1.2 醋酸菌简介 | 第9页 |
| 1.3 耐乙醇醋酸菌的选育和改造 | 第9-10页 |
| 1.4 乙醇耐受机制研究 | 第10-11页 |
| 1.5 代谢组学 | 第11-13页 |
| 1.5.1 代谢组学概述 | 第11-12页 |
| 1.5.2 统计学分析方法 | 第12页 |
| 1.5.3 代谢组学的应用 | 第12-13页 |
| 1.6 论文研究内容与意义 | 第13-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-16页 |
| 2.1.1 菌株 | 第15页 |
| 2.1.2 培养基 | 第15页 |
| 2.1.3 培养条件 | 第15页 |
| 2.1.4 质粒 | 第15-16页 |
| 2.1.5 引物 | 第16页 |
| 2.2 仪器与试剂 | 第16-21页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第16-17页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第17-19页 |
| 2.2.3 主要溶液及缓冲液 | 第19-21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-29页 |
| 2.3.1 巴氏醋杆菌的培养方法 | 第21页 |
| 2.3.2 大肠杆菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞的制备及转化方法 | 第21-22页 |
| 2.3.3 巴氏醋杆菌感受态细胞的制备及电击转化 | 第22-23页 |
| 2.3.4 耐受乙醇巴氏醋杆菌工程菌株的构建 | 第23-26页 |
| 2.3.5 工程菌株与亲本菌株在高浓度乙醇条件下的发酵性能比较 | 第26-27页 |
| 2.3.6 通过GC-MS代谢组学分析方法对菌株的乙醇耐受机制进行研究 | 第27-29页 |
| 2.4 分析方法 | 第29-31页 |
| 2.4.1 产酸量测定 | 第29页 |
| 2.4.2 乙醇浓度的测定 | 第29页 |
| 2.4.3 乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶酶活测定 | 第29-30页 |
| 2.4.4 菌体生物量的测定 | 第30-31页 |
| 3 结果与讨论 | 第31-55页 |
| 3.1 耐受乙醇的巴氏醋杆菌工程菌株的构建 | 第31-34页 |
| 3.1.1 hisl基因的克隆 | 第31页 |
| 3.1.2 重组质粒pMD18T-hisl和pMV24-hisl的构建 | 第31-32页 |
| 3.1.3 重组质粒pMTV24-hisl在E.coli BL21(DE3)中的表达 | 第32-33页 |
| 3.1.4 重组质粒pMV24-hisl在巴氏醋杆菌 A.pasteurianus HN101中的表达 | 第33-34页 |
| 3.2 工程菌株的遗传稳定性实验 | 第34页 |
| 3.3 不同乙醇浓度下菌株的生长情况及产酸量变化 | 第34-35页 |
| 3.4 工程菌株的产酸稳定性试验 | 第35-36页 |
| 3.5 工程菌株与亲本菌株在9%(v/v)乙醇浓度发酵条件下的发酵性能比较 | 第36-41页 |
| 3.5.1 工程菌株与亲本菌株的吸光度、pH值、产酸量变化 | 第36-37页 |
| 3.5.2 工程菌株与亲本菌株的残糖、残醇变化及其转化率 | 第37-39页 |
| 3.5.3 工程菌株与亲本菌株的乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶酶活 | 第39-40页 |
| 3.5.4 小结 | 第40-41页 |
| 3.6 工程菌株与亲本菌株胞内小分子代谢物分析比较 | 第41-55页 |
| 3.6.1 胞内代谢物的检测与定性定量分析 | 第41-43页 |
| 3.6.2 工程菌株和亲本菌株胞内代谢物多元统计分析 | 第43-48页 |
| 3.6.3 结合代谢网络分析 | 第48-54页 |
| 3.6.4 小结 | 第54-55页 |
| 4 结论 | 第55-56页 |
| 5 展望 | 第56-57页 |
| 6 参考文献 | 第57-63页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第63-64页 |
| 8 致谢 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65页 |
