| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 引言 | 第12-28页 |
| 1.1 研究目的与意义 | 第12-13页 |
| 1.1.1 研究目的 | 第12页 |
| 1.1.2 研究意义 | 第12-13页 |
| 1.2 抗菌肽的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.2.1 抗菌肽的来源与特点 | 第13-15页 |
| 1.2.2 抗菌肽的生理功能及机理 | 第15-17页 |
| 1.3 牛乳铁蛋白肽 | 第17-24页 |
| 1.3.1 牛乳铁蛋白肽的来源 | 第17-18页 |
| 1.3.2 牛乳铁蛋白肽的结构特征 | 第18-19页 |
| 1.3.3 牛乳铁蛋白肽的生物活性 | 第19-22页 |
| 1.3.4 牛乳铁蛋白肽的基因工程制备 | 第22-24页 |
| 1.4 TaqSSB蛋白 | 第24-26页 |
| 1.4.1 TaqSSB蛋白的特性 | 第24-25页 |
| 1.4.2 TaqSSB蛋白的结构特点 | 第25-26页 |
| 1.5 立题依据与研究意义 | 第26-28页 |
| 1.5.1 立题依据 | 第26页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第26-28页 |
| 第2章 大肠杆菌热稳定单链DNA结合蛋白表达及纯化 | 第28-54页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第28-34页 |
| 2.1.1 菌株与载体 | 第28页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.3 实验试剂与试剂盒 | 第29-30页 |
| 2.1.4 培养基及试剂的配置 | 第30-34页 |
| 2.2 基因设计,载体构建,引物合成及鉴定 | 第34-40页 |
| 2.2.1 pET22b-TaqSSB表达载体构建 | 第34-36页 |
| 2.2.2 pET22b-LfcinB-TaqSSB表达载体构建(N端) | 第36-37页 |
| 2.2.3 pET22b-TaqSSB-LfcinB表达载体构建(C端) | 第37-39页 |
| 2.2.4 引物设计 | 第39页 |
| 2.2.5 重组质粒的转化 | 第39-40页 |
| 2.2.6 菌落PCR鉴定阳性克隆 | 第40页 |
| 2.2.7 序列测序分析 | 第40页 |
| 2.3 重组蛋白的诱导与表达 | 第40-42页 |
| 2.3.1 利用乳糖操纵子原理诱导蛋白表达 | 第40-41页 |
| 2.3.2 重组蛋白表达情况检测 | 第41-42页 |
| 2.4 TaqSSB蛋白的无柱式纯化设计 | 第42-44页 |
| 2.4.1 样品总蛋白的提取 | 第42页 |
| 2.4.2 硫酸铵沉淀TaqSSB重组蛋白 | 第42-43页 |
| 2.4.3 重悬硫酸铵沉淀并加热纯化TaqSSB重组蛋白 | 第43页 |
| 2.4.4 胃蛋白酶水解TaqSSB重组蛋白 | 第43-44页 |
| 2.4.5 TaqSSB蛋白活性的鉴定 | 第44页 |
| 2.5 结果与分析 | 第44-52页 |
| 2.5.1 菌落PCR鉴定 | 第44-45页 |
| 2.5.2 基因测序分析 | 第45-46页 |
| 2.5.3 TaqSSB蛋白的诱导及表达 | 第46-48页 |
| 2.5.4 TaqSSB蛋白的无柱式纯化 | 第48-50页 |
| 2.5.5 胃蛋白酶水解TaqSSB蛋白 | 第50-51页 |
| 2.5.6 TaqSSB蛋白的活性鉴定 | 第51-52页 |
| 2.6 小结 | 第52-54页 |
| 第3章 牛乳铁蛋白肽的融合表达及纯化 | 第54-68页 |
| 3.1 实验材料 | 第54页 |
| 3.1.1 菌株与载体 | 第54页 |
| 3.1.2 实验器械 | 第54页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第54页 |
| 3.2 基因设计,载体构建及鉴定 | 第54-56页 |
| 3.2.1 pET22b-LfcinB-TaqSSB表达载体构建(N)端 | 第54页 |
| 3.2.2 pET22b-TaqSSB-LfcinB表达载体构建(C)端 | 第54页 |
| 3.2.3 引物设计 | 第54页 |
| 3.2.4 pET22b-LfcinB-TaqSSB(N端)重组质粒的转化 | 第54-55页 |
| 3.2.5 pET22b-TaqSSB-LfcinB(C端)质粒的转化 | 第55页 |
| 3.2.6 菌落PCR鉴定两种重组载体的阳性克隆 | 第55页 |
| 3.2.7 基因测序分析 | 第55-56页 |
| 3.3 两种融合蛋白的诱导与表达 | 第56页 |
| 3.3.1 融合蛋白的诱导表达 | 第56页 |
| 3.3.2 融合蛋白的表达检测 | 第56页 |
| 3.4 融合蛋白的无柱式纯化 | 第56-59页 |
| 3.4.1 融合蛋白样品提取 | 第56-57页 |
| 3.4.2 硫酸铵沉淀融合蛋白 | 第57页 |
| 3.4.3 重悬硫酸铵沉淀并加热纯化融合蛋白 | 第57页 |
| 3.4.4 牛乳铁蛋白肽的纯化 | 第57-58页 |
| 3.4.5 牛乳铁蛋白肽的超滤浓缩及冷冻干燥 | 第58-59页 |
| 3.5 结果与分析 | 第59-66页 |
| 3.5.1 菌落PCR鉴定 | 第59页 |
| 3.5.2 基因测序分析 | 第59-61页 |
| 3.5.3 融合蛋白的诱导与表达 | 第61-62页 |
| 3.5.4 硫酸铵盐析沉淀融合蛋白 | 第62-63页 |
| 3.5.5 融合蛋白的无柱式纯化 | 第63-64页 |
| 3.5.6 胃蛋白酶对融合蛋白的水解纯化 | 第64-65页 |
| 3.5.7 牛乳铁蛋白肽的超滤浓缩及冷冻干燥 | 第65-66页 |
| 3.6 小结 | 第66-68页 |
| 第4章 牛乳铁蛋白肽的鉴定及抑菌活性鉴定 | 第68-88页 |
| 4.1 实验材料 | 第68页 |
| 4.1.1 菌株与载体 | 第68页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第68页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第68页 |
| 4.1.4 溶液及培养基的配置 | 第68页 |
| 4.2 牛乳铁蛋白肽的鉴定 | 第68-70页 |
| 4.2.1 高效液相色谱分析LfcinB纯度 | 第68页 |
| 4.2.2 高效液相色谱分离纯化多肽 | 第68-69页 |
| 4.2.3 ESI质谱分析多肽分子量 | 第69页 |
| 4.2.4 LC-MS检测多肽序列 | 第69-70页 |
| 4.3 牛乳铁蛋白肽的抑菌活性检测 | 第70-72页 |
| 4.3.1 BCA法测定LfcinB溶液浓度 | 第70-71页 |
| 4.3.2 最小抑菌浓度(MIC50)及抑菌率测定 | 第71-72页 |
| 4.3.3 体外抑菌活性鉴定 | 第72页 |
| 4.4 牛乳铁蛋白肽对猪肉模型的保鲜 | 第72-73页 |
| 4.4.1 猪肉模型的建立 | 第72页 |
| 4.4.2 猪肉模型保鲜效果的鉴定 | 第72-73页 |
| 4.5 结果与分析 | 第73-86页 |
| 4.5.1 高效液相色谱分析 | 第73-74页 |
| 4.5.2 酶解液LfcinB的纯化 | 第74-75页 |
| 4.5.3 质谱鉴定酶解液LfcinB的分子量 | 第75-76页 |
| 4.5.4 酶解液LfcinB序列分析 | 第76-77页 |
| 4.5.5 酶解液LfcinB的浓度测定 | 第77页 |
| 4.5.6 酶解液LfcinB对革兰阳性菌MIC50测定 | 第77-80页 |
| 4.5.7 酶解液LfcinB对革兰阴性菌MIC50测定 | 第80-82页 |
| 4.5.8 酶解液LfcinB体外抑菌实验 | 第82-83页 |
| 4.5.9 猪肉模型的建立 | 第83-84页 |
| 4.5.10 猪肉模型感官指标变化测定 | 第84-86页 |
| 4.6 小结 | 第86-88页 |
| 第5章 总结 | 第88-91页 |
| 5.1 研究总结 | 第88-89页 |
| 5.2 创新点 | 第89-90页 |
| 5.3 展望 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第100页 |
