大肠杆菌生物合成苯酚及酶法合成高谷氨酸
| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第14-20页 |
| 1.1 合成生物学 | 第14页 |
| 1.2 莽草酸途径的改造 | 第14-15页 |
| 1.3 多酶偶联体系 | 第15-17页 |
| 1.3.1 NAD(P)H的再生 | 第16-17页 |
| 1.3.2 ATP的再生 | 第17页 |
| 1.3.3 糖核苷酸再生 | 第17页 |
| 1.4 苯酚的生产方式和用途 | 第17-18页 |
| 1.5 高谷氨酸的生产方式和用途 | 第18页 |
| 1.6 立题的目的和意义 | 第18页 |
| 1.7 主要研究内容 | 第18-20页 |
| 第二章 实验方法 | 第20-28页 |
| 2.1 实验仪器 | 第20页 |
| 2.2 试剂 | 第20页 |
| 2.3 培养基 | 第20页 |
| 2.4 质粒和基因组的提取 | 第20-21页 |
| 2.4.1 质粒的提取 | 第20-21页 |
| 2.4.2 基因组的提取 | 第21页 |
| 2.5 PCR扩增 | 第21-22页 |
| 2.6 目的基因的纯化和回收 | 第22-23页 |
| 2.7 酶切 | 第23页 |
| 2.8 琼脂糖凝胶电泳 | 第23-24页 |
| 2.9 连接 | 第24页 |
| 2.10 转化 | 第24-25页 |
| 2.10.1 化学转化 | 第24页 |
| 2.10.2 电转化 | 第24-25页 |
| 2.11 目的蛋白的表达和纯化 | 第25-26页 |
| 2.11.1 目的蛋白表达 | 第25页 |
| 2.11.2 破碎细胞 | 第25页 |
| 2.11.3 蛋白纯化 | 第25-26页 |
| 2.12 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第26-27页 |
| 2.13 OD600测定细胞浓度 | 第27页 |
| 2.14 蛋白浓度的测定 | 第27-28页 |
| 第三章 莽草酸途径生物合成苯酚 | 第28-44页 |
| 3.1 前言 | 第28页 |
| 3.2 实验材料 | 第28-30页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第28-29页 |
| 3.2.2 实验质粒及引物 | 第29-30页 |
| 3.3 实验方法 | 第30-37页 |
| 3.3.1 质粒构建 | 第30-33页 |
| 3.3.2 BDC酶活测试 | 第33-34页 |
| 3.3.3 HPLC检测 | 第34-35页 |
| 3.3.4 苯酚的毒性实验 | 第35页 |
| 3.3.5 体外添加实验 | 第35页 |
| 3.3.6 从头合成实验 | 第35页 |
| 3.3.7 模块优化 | 第35-36页 |
| 3.3.8 发酵菌株优化 | 第36页 |
| 3.3.9 发酵条件优化 | 第36-37页 |
| 3.4 实验结果 | 第37-41页 |
| 3.4.1 苯酚毒性实验结果 | 第37页 |
| 3.4.2 添加水杨酸生产苯酚 | 第37-38页 |
| 3.4.3 从头合成苯酚及模块优化结果 | 第38-39页 |
| 3.4.4 菌株优化结果 | 第39-40页 |
| 3.4.5 发酵条件优化结果 | 第40-41页 |
| 3.5 讨论 | 第41-44页 |
| 第四章 双酶偶联生物制备高谷氨酸 | 第44-78页 |
| 4.1 前言 | 第44页 |
| 4.2 实验材料 | 第44-45页 |
| 4.2.1 实验菌株 | 第44页 |
| 4.2.2 实验质粒及引物 | 第44-45页 |
| 4.3 实验方法 | 第45-67页 |
| 4.3.1 转氨酶的筛选 | 第46页 |
| 4.3.2 重组质粒的构建 | 第46-59页 |
| 4.3.3 反应中酶的体外活性测定 | 第59-63页 |
| 4.3.4 计算机模拟转氨酶和底物的结合模型 | 第63-64页 |
| 4.3.5 重叠延伸PCR定点突变 | 第64-66页 |
| 4.3.6 HPLC检测 | 第66-67页 |
| 4.4 实验结果 | 第67-77页 |
| 4.4.1 TiPDH基因的定点突变结果 | 第67-69页 |
| 4.4.2 modTiPDH对天然底物的作用 | 第69-71页 |
| 4.4.3 酶学性质的研究 | 第71-73页 |
| 4.4.4 添加保护剂对酶稳定性影响 | 第73-75页 |
| 4.4.5 辅酶循环体系的优化结果 | 第75-77页 |
| 4.5 讨论 | 第77-78页 |
| 第五章 结论和展望 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 附录1 | 第84-86页 |
| 附录2 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第90-92页 |
| 作者和导师简介 | 第92-93页 |
| 附件 | 第93-94页 |
