| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 白酒工业概况 | 第10页 |
| 1.2 白酒中主要风味物质概述 | 第10-13页 |
| 1.2.1 高级醇类物质 | 第11页 |
| 1.2.2 酯类物质 | 第11-12页 |
| 1.2.3 酸类物质 | 第12-13页 |
| 1.2.4 醛类物质 | 第13页 |
| 1.3 酯类物质的合成途径和机理 | 第13-14页 |
| 1.3.1 酯化反应途径 | 第13页 |
| 1.3.2 醇酰基转移酶途径 | 第13-14页 |
| 1.4 提高酿酒酵母酯类合成的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4.1 诱变筛选高产酯类的酿酒酵母 | 第14-15页 |
| 1.4.2 利用分子生物学的方法提高酿酒酵母酯类合成 | 第15页 |
| 1.5 酿酒酵母中乙酰辅酶A的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.5.1 乙酰辅酶A简述 | 第15页 |
| 1.5.2 乙酰辅酶A的代谢途径 | 第15-17页 |
| 1.5.3 提高乙酰辅酶A合成对酯类物质的研究进展 | 第17页 |
| 1.6 本论文的立题依据及研究内容 | 第17-19页 |
| 1.6.1 立题依据 | 第17-18页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第19-20页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20-22页 |
| 2.1.4 主要培养基 | 第22页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-35页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第23-26页 |
| 2.2.2 目的基因片段的获得 | 第26-28页 |
| 2.2.3 重组质粒的构建 | 第28-30页 |
| 2.2.4 酵母转化 | 第30-31页 |
| 2.2.5 KanMx筛选标记的去除 | 第31-32页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR | 第32-34页 |
| 2.2.7 生长曲线的测定 | 第34页 |
| 2.2.8 发酵实验 | 第34-35页 |
| 2.3 分析方法 | 第35-38页 |
| 2.3.1 CO_2排放量的测定 | 第35页 |
| 2.3.2 酒精度测定 | 第35页 |
| 2.3.3 残余还原糖测定 | 第35-36页 |
| 2.3.4 高级醇和酯类含量的测定 | 第36页 |
| 2.3.5 乙酰辅酶A含量的测定 | 第36-37页 |
| 2.3.6 乙酸含量的测定 | 第37页 |
| 2.3.7 酶活测定 | 第37-38页 |
| 3 结果与讨论 | 第38-77页 |
| 3.1 敲除ACH1基因对乙酰辅酶A的影响 | 第38-43页 |
| 3.1.1 敲除ACH1基因菌株的获得 | 第38-39页 |
| 3.1.2 摇床条件下及发酵条件下乙酰辅酶A及底物乙酸含量的测定 | 第39-42页 |
| 3.1.3 玉米糖化醪及玉米糖化醪清液发酵实验 | 第42-43页 |
| 3.1.4 小结 | 第43页 |
| 3.2 过表达ALD6基因对乙酰辅酶A的影响 | 第43-51页 |
| 3.2.1 重组质粒Yep-PAK6的构建过程 | 第43-45页 |
| 3.2.2 ALD6基因整合过表达酵母菌株的获得 | 第45-47页 |
| 3.2.3 ALD6基因表达水平测定和酶活测定 | 第47-48页 |
| 3.2.4 摇床条件及发酵条件下乙酰辅酶A及底物乙酸含量的测定 | 第48-50页 |
| 3.2.5 玉米糖化醪及玉米糖化醪清液发酵实验 | 第50-51页 |
| 3.2.6 小结 | 第51页 |
| 3.3 过表达ACS1和ACS2基因对乙酰辅酶A的影响 | 第51-70页 |
| 3.3.1 单独过表达乙酰辅酶A合成酶基因ACS1/2对乙酰辅酶A的影响 | 第52-59页 |
| 3.3.2 过表达ACS1及ACS2同时过表达ATF1基因对乙酰辅酶A的影响 | 第59-63页 |
| 3.3.3 去乙酰化位点对乙酰辅酶A合成的影响 | 第63-69页 |
| 3.3.4 小结 | 第69-70页 |
| 3.4 共表达ALD6基因及定点突变基因ACS1~(L707P)对乙酰辅酶A的影响 | 第70-77页 |
| 3.4.1 游离共表达质粒Yep-ABLS的构建 | 第70-71页 |
| 3.4.2 游离共表达菌株的获得 | 第71-72页 |
| 3.4.3 整合共表达菌株的获得 | 第72-73页 |
| 3.4.4 共表达菌株与亲本菌株乙酸及乙酰辅酶A含量的测定 | 第73-74页 |
| 3.4.5 共表达菌株与亲本菌株发酵性能的测定 | 第74-75页 |
| 3.4.6 共表达菌株与亲本菌株高级醇及乙酸乙酯含量的测定 | 第75-76页 |
| 3.4.7 小结 | 第76-77页 |
| 4 结论 | 第77-78页 |
| 5 展望 | 第78-79页 |
| 6 参考文献 | 第79-85页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第85-86页 |
| 8 致谢 | 第86页 |
