| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-25页 |
| ·酱油发酵 | 第9-11页 |
| ·高盐稀态发酵工艺 | 第9-10页 |
| ·低盐固态发酵工艺 | 第10页 |
| ·固稀结合发酵工艺 | 第10-11页 |
| ·酱油生产现状 | 第11-12页 |
| ·国际酱油生产现状 | 第11页 |
| ·国内酱油生产现状 | 第11-12页 |
| ·提高酱油质量的方法 | 第12-15页 |
| ·固定化技术 | 第12-13页 |
| ·添加酶制剂 | 第13页 |
| ·改造米曲霉 | 第13页 |
| ·添加产香酵母 | 第13-14页 |
| ·构建耐盐酵母 | 第14-15页 |
| ·耐盐机制的理论基础 | 第15-19页 |
| ·渗透休克反应 | 第16页 |
| ·甘油代谢和水甘油通道蛋白 | 第16-17页 |
| ·高渗透性甘油(HOG)的信号系统 | 第17页 |
| ·转录反应 | 第17-19页 |
| ·信号控制的研究 | 第19页 |
| ·分子生物学及生物信息学 | 第19-22页 |
| ·分子生物学的研究方法 | 第19-20页 |
| ·生物信息学 | 第20-22页 |
| ·本论文研究的目的、意义和主要内容 | 第22-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-44页 |
| ·实验材料 | 第25-31页 |
| ·菌株与质粒 | 第25-26页 |
| ·酶与试剂 | 第26-28页 |
| ·仪器及设备 | 第28-29页 |
| ·溶液与培养基 | 第29-31页 |
| ·实验方法 | 第31-44页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·RNA提取及反转录 | 第31-32页 |
| ·酵母DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·测序质粒的构建 | 第33-36页 |
| ·重组质粒pUC19-T-HOG1和pUC19-T3-5-HOG1的鉴定 | 第36-37页 |
| ·测序结果与二、三级结构分析 | 第37页 |
| ·表达质粒的构建 | 第37-39页 |
| ·重组质粒YEp195-T-HOG1和YEp195-T3-5-HOG1转化至酵母W303-1A中 | 第39-40页 |
| ·酵母阳性克隆菌株的鉴定 | 第40-42页 |
| ·菌株WYTHOG1和WY5HOG1的比较 | 第42-44页 |
| 3 结果与讨论 | 第44-62页 |
| ·HOG1基因的RNA表达量 | 第44-45页 |
| ·RNA提取 | 第44页 |
| ·反转录及半定量PCR | 第44-45页 |
| ·HOG1的测序 | 第45-49页 |
| ·酵母DNA的提取 | 第45-46页 |
| ·HOG1的PCR产物制备 | 第46页 |
| ·PCR产物的纯化浓缩 | 第46-47页 |
| ·产物与pUC19的双酶切 | 第47-48页 |
| ·产物与pUC19的连接与转化 | 第48页 |
| ·克隆子的提取与鉴定 | 第48-49页 |
| ·测序结果与结构分析 | 第49-54页 |
| ·基因测序结果分析 | 第49-52页 |
| ·Hog1p蛋白氨基酸序列分析 | 第52-53页 |
| ·Hog1p蛋白二、三级结构分析 | 第53-54页 |
| ·酵母工程菌株的构建 | 第54-56页 |
| ·质粒YEp195-T-HOG1和YEp195-T3-5-HOG1的构建 | 第54-55页 |
| ·重组质粒YEp195-T3-5-HOG1和YEp195-T3-5-HOG1的鉴定 | 第55页 |
| ·重组质粒和空白质粒分别转化至酵母W303-1A | 第55-56页 |
| ·酵母工程菌株的鉴定 | 第56页 |
| ·过量表达Hog1p蛋白 | 第56-62页 |
| ·细胞形态变化 | 第56-57页 |
| ·耐盐性生长曲线变化 | 第57-59页 |
| ·抗性变化 | 第59-60页 |
| ·甘油产量变化 | 第60页 |
| ·Hog1p的表达 | 第60-62页 |
| 4 结论 | 第62-63页 |
| 5 展望 | 第63-64页 |
| 6 参考文献 | 第64-70页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第70-71页 |
| 8 致谢 | 第71页 |
