| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-34页 |
| ·脂环酸芽孢杆菌的研究进展 | 第13-17页 |
| ·脂环酸芽孢杆菌的发现 | 第13页 |
| ·脂环酸芽孢杆菌的命名及分类 | 第13-14页 |
| ·酸土脂环酸芽孢杆菌的生理生化特性 | 第14页 |
| ·酸土脂环酸芽孢杆菌的危害 | 第14-15页 |
| ·酸土脂环酸芽孢杆菌的鉴定 | 第15页 |
| ·酸土脂环酸芽孢杆菌的检测与控制 | 第15-16页 |
| ·酸土脂环酸芽孢杆菌的致病性 | 第16-17页 |
| ·嗜热微生物的耐热机制 | 第17-20页 |
| ·细胞结构及细胞膜化学成分组成 | 第17页 |
| ·遗传物质的热稳定性 | 第17-18页 |
| ·蛋白质的热稳定性 | 第18-20页 |
| ·热休克蛋白 | 第20-25页 |
| ·热休克蛋白的命名与分类 | 第20-21页 |
| ·HSP70 的生物学特性 | 第21-22页 |
| ·HSP70 的功能 | 第22页 |
| ·热休克蛋白 DnaK 的结构域 | 第22-23页 |
| ·热休克蛋白 DnaK 的作用机制 | 第23-25页 |
| ·热休克蛋白与嗜热微生物生理适应机制 | 第25页 |
| ·基因组步移技术 | 第25-27页 |
| ·基因组步移技术概述 | 第25-26页 |
| ·基因组步移技术分类 | 第26页 |
| ·TAIL-PCR 技术 | 第26-27页 |
| ·反转录荧光定量 PCR 技术（Real-Time RT-PCR） | 第27-31页 |
| ·Real-Time RT-PCR 技术原理 | 第27-28页 |
| ·SYBR Green 法 | 第28-29页 |
| ·影响实时荧光定量 PCR 的因素 | 第29-30页 |
| ·逆转录实时荧光定量 PCR 的应用 | 第30-31页 |
| ·研究目的与意义 | 第31-32页 |
| ·立题依据 | 第31-32页 |
| ·研究意义 | 第32页 |
| ·研究内容与技术路线 | 第32-34页 |
| ·研究内容 | 第32-33页 |
| ·技术路线 | 第33-34页 |
| 第二章 酸土脂环酸芽孢杆菌 DnaK 基因克隆及生物信息学分析 | 第34-54页 |
| ·材料与方法 | 第34-38页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·菌株和培养基 | 第35页 |
| ·基因组 DNA 提取 | 第35页 |
| ·引物设计及保守区片段克隆 | 第35-36页 |
| ·基因组步移技术获取基因全长 | 第36-38页 |
| ·序列及生物信息学分析 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-51页 |
| ·基因组 DNA 提取 | 第38页 |
| ·DnaK 基因保守区片段克隆 | 第38-39页 |
| ·DnaK 基因全长克隆及序列分析 | 第39-43页 |
| ·DnaK 氨基酸序列分析 | 第43-46页 |
| ·Alicyclobacillus acidoterrestris DSM 3922T 的 DnaK 的结构特征 | 第46-50页 |
| ·AaDnaK 蛋白同源建模 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 第三章 Real Time RT-PCR 检测 A. acidoterrestris DnaK 基因在胁迫条件下的表达差异 | 第54-69页 |
| ·材料与方法 | 第54-58页 |
| ·材料 | 第54页 |
| ·菌株和培养基 | 第54-55页 |
| ·菌体 RNA 提取 | 第55页 |
| ·酸、热、冷环境胁迫酸土脂环酸芽孢杆菌 | 第55-56页 |
| ·胁迫条件对 A. acidoterrestris 的生长情况影响 | 第56页 |
| ·实时荧光定量引物设计及筛选 | 第56-57页 |
| ·不同胁迫条件下 A. acidoterrestris DnaK 表达的 Real Time RT-PCR 分析 | 第57-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-66页 |
| ·提取 RNA 的电泳鉴定 | 第58-59页 |
| ·胁迫处理对 A. acidoterrestris 生长情况的影响 | 第59-62页 |
| ·实时定量实验引物筛选 | 第62页 |
| ·不同培养温度下脂环酸芽孢杆菌 DnaK 基因表达的相对定量检测 | 第62-63页 |
| ·高温胁迫条件下脂环酸芽孢杆菌 DnaK 基因表达的相对定量检测 | 第63-64页 |
| ·酸胁迫条件下脂环酸芽孢杆菌 DnaK 基因表达的相对定量检测 | 第64-65页 |
| ·冷胁迫条件下脂环酸芽孢杆菌 DnaK 基因表达的相对定量检测 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| ·小结 | 第68-69页 |
| 第四章 酸土脂环酸芽孢杆菌 DnaK 基因原核表达 | 第69-83页 |
| ·仪器设备与材料 | 第69-70页 |
| ·主要仪器 | 第69页 |
| ·菌种与质粒 | 第69页 |
| ·培养基与试剂 | 第69-70页 |
| ·试验方法 | 第70-76页 |
| ·原核表达载体构建 | 第70-72页 |
| ·转化及阳性克隆筛选 | 第72页 |
| ·菌落 PCR 验证 | 第72页 |
| ·重组子质粒的双酶切鉴定 | 第72页 |
| ·DnaK 基因的表达及分析 | 第72-74页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第74-76页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第76页 |
| ·结果与分析 | 第76-81页 |
| ·DnaK 片段扩增 | 第76页 |
| ·表达载体 pET-28a(＋)-DnaK 的构建 | 第76-78页 |
| ·DnaK 基因原核表达定位分析 | 第78-79页 |
| ·pH 对重组大肠杆菌 DnaK 表达的影响 | 第79页 |
| ·温度对重组大肠杆菌 DnaK 表达的影响 | 第79-80页 |
| ·重组 DnaK 的纯化 | 第80-81页 |
| ·讨论 | 第81页 |
| ·小结 | 第81-83页 |
| 第五章 酸土脂环酸芽孢杆菌 DnaK 基因异源表达对大肠杆菌胁迫抗性的影响 | 第83-92页 |
| ·仪器设备与材料 | 第83-84页 |
| ·试验材料 | 第83页 |
| ·主要仪器设备 | 第83-84页 |
| ·常用试剂的配制 | 第84页 |
| ·试验方法 | 第84-86页 |
| ·大肠杆菌在高温与最适温度条件下的生长曲线测定 | 第84-85页 |
| ·胁迫实验 | 第85-86页 |
| ·结果与分析 | 第86-90页 |
| ·DnaK 基因对大肠杆菌在高温下生长的影响 | 第86-87页 |
| ·DnaK 基因诱导表达对重组大肠杆菌氧化抗性的影响 | 第87-88页 |
| ·DnaK 基因表达对重组大肠杆菌抗酸能力的影响 | 第88-89页 |
| ·DnaK 基因表达对重组大肠杆菌抗碱能力的影响 | 第89-90页 |
| ·DnaK 基因表达对重组大肠杆菌抗高温能力的影响 | 第90页 |
| ·讨论 | 第90-91页 |
| ·小结 | 第91-92页 |
| 第六章 结论与创新点 | 第92-93页 |
| ·结论 | 第92页 |
| ·创新点 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 作者简介 | 第103页 |
