| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一章 综述 | 第12-22页 |
| ·前言 | 第12页 |
| ·β-乳球蛋白的结构特征 | 第12-13页 |
| ·β-乳球蛋白的稳定性 | 第13-15页 |
| ·温度对β-乳球蛋白稳定性的影响 | 第14页 |
| ·pH对β-乳球蛋白稳定性的影响 | 第14页 |
| ·金属离子对β-乳球蛋白热稳定性的影响 | 第14页 |
| ·糖基化修饰对β-乳球蛋白稳定性的影响 | 第14-15页 |
| ·其它因素的影响 | 第15页 |
| ·β-乳球蛋白的生理特性 | 第15-16页 |
| ·过敏原表位 | 第16-18页 |
| ·表位定位研究方法 | 第17-18页 |
| ·β-乳球蛋白的过敏原性 | 第18-20页 |
| ·β-乳球蛋白表位 | 第18-19页 |
| ·加工对β-乳球蛋白过敏性的影响 | 第19-20页 |
| ·表位疫苗 | 第20-21页 |
| ·立题背景与研究内容 | 第21-22页 |
| ·立题背景 | 第21页 |
| ·研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 牛乳β-乳球蛋白过敏原表位串联体的分子设计 | 第22-29页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·牛乳β—乳球蛋白的线性表位 | 第22页 |
| ·计算机分析软件及服务器 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-24页 |
| ·表位串联体设计的原理 | 第23页 |
| ·表位串联体分子组合的模式 | 第23页 |
| ·串联体中各表位的理论组合数 | 第23页 |
| ·DNAStar预测串联体B细胞线性表位 | 第23-24页 |
| ·SOMPA预测串联体二级结构 | 第24页 |
| ·结果与分析 | 第24-28页 |
| ·Genbank中牛乳β-乳球蛋白的氨基酸序列 | 第24-25页 |
| ·DNAStar预测串联体B细胞线性表位 | 第25-26页 |
| ·SOMPA预测串联体二级结构 | 第26-27页 |
| ·讨论 | 第27-28页 |
| ·本章小结 | 第28-29页 |
| 第三章 pGEX-4T-1-tan重组质粒的构建 | 第29-40页 |
| ·引言 | 第29页 |
| ·实验材料 | 第29-31页 |
| ·菌株、质粒 | 第29页 |
| ·工具酶、分子量Marker及主要生化试剂 | 第29-30页 |
| ·主要仪器与设备 | 第30-31页 |
| ·常规培养基及溶液的配制 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-35页 |
| ·基因合成 | 第31页 |
| ·菌株培养 | 第31-32页 |
| ·高纯度质粒小量提取方法 | 第32页 |
| ·质粒的限制性双酶切 | 第32-33页 |
| ·回收酶切后的DNA片段 | 第33页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌E.coliBL21(DE3)pLysS感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第34-35页 |
| ·表达载体pGEX-4T-1-tan的鉴定 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-38页 |
| ·设计的酶切位点 | 第35-36页 |
| ·pMD19-T-tan的酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·表达载体的鉴定 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第38-39页 |
| ·密码子的选择 | 第39页 |
| ·本章小结 | 第39-40页 |
| 第四章 重组质粒在原核系统中的表达及表达产物的纯化 | 第40-52页 |
| ·引言 | 第40页 |
| ·实验材料 | 第40-42页 |
| ·主要仪器与设备 | 第40-41页 |
| ·常规培养基及溶液的配制 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-46页 |
| ·pGEX-4T-1-tan在E.coli BL21(DE3)pLysS中的表达 | 第42页 |
| ·SDS-PAGE分析检测表达的融合蛋白 | 第42-43页 |
| ·Western blotting分析检测表达蛋白 | 第43页 |
| ·制备上清 | 第43页 |
| ·串联体融合蛋白可溶性表达的条件探索 | 第43-44页 |
| ·β-乳球蛋白多表位串联体融合蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| ·Lowry法测蛋白浓度 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-50页 |
| ·SDS-PAGE检测结果 | 第46页 |
| ·Western blotting检测结果 | 第46-48页 |
| ·可溶性表达的最佳条件 | 第48页 |
| ·融合蛋白的纯化结果 | 第48-49页 |
| ·蛋白浓度 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-51页 |
| ·GST融合蛋白的表达 | 第50页 |
| ·蛋白的可溶性表达 | 第50-51页 |
| ·蛋白的亲和纯化 | 第51页 |
| ·本章小节 | 第51-52页 |
| 第五章 牛乳β-乳球蛋白表位串联体免疫特异性研究 | 第52-64页 |
| ·引言 | 第52页 |
| ·材料与设备 | 第52-53页 |
| ·试剂 | 第52页 |
| ·仪器与耗材 | 第52页 |
| ·溶液配制 | 第52-53页 |
| ·方法 | 第53-57页 |
| ·抗β-乳球蛋白多表位串联体多克隆抗体的制备 | 第53-54页 |
| ·牛乳过敏患者血清的来源 | 第54页 |
| ·方正滴定确定包被浓度和二抗稀释倍数 | 第54-55页 |
| ·间接ELISA测抗体效价 | 第55页 |
| ·方正滴定确定—抗最佳稀释倍数 | 第55-56页 |
| ·间接竞争ELISA | 第56页 |
| ·间接ELISA法评价蛋白过敏原性 | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-62页 |
| ·抗血清效价间接ELISA检测方法的建立 | 第57页 |
| ·免疫过程中抗体效价的变化 | 第57-58页 |
| ·抗原包被浓度和—抗最佳稀释倍数的确定 | 第58页 |
| ·β-乳球蛋白表位串联体的抗原性评估 | 第58-61页 |
| ·牛乳β-乳球蛋白表位串联体的过敏原性评估 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-63页 |
| ·多抗的制备 | 第62页 |
| ·抗原性评估 | 第62-63页 |
| ·过敏原性评估 | 第63页 |
| ·本章小结 | 第63-64页 |
| 第六章 结论与展望 | 第64-65页 |
| ·结论 | 第64页 |
| ·本研究的创新点 | 第64页 |
| ·展望与建议 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第75页 |
