| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9页 |
| 英文缩写符号及中英文对照表 | 第10-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-29页 |
| 1.1 延长番茄货架期及提高番茄品质的研究进展 | 第17-26页 |
| 1.1.1 番茄的作用及储存现状 | 第17页 |
| 1.1.2 番茄红素的作用及意义 | 第17-18页 |
| 1.1.3 番茄成熟的影响因子 | 第18-20页 |
| 1.1.4 延长番茄货架期的常用方法 | 第20-21页 |
| 1.1.5 转基因技术的发展 | 第21页 |
| 1.1.6 基因编辑技术的简介 | 第21-22页 |
| 1.1.7 CRISPR/Cas技术的研究进展 | 第22-26页 |
| 1.2 MDHAR的功能及其相关基因的研究进展 | 第26-27页 |
| 1.2.1 抗坏血酸的简介 | 第26页 |
| 1.2.2 MDHAR的简介 | 第26-27页 |
| 1.3 本研究的目的、内容及意义 | 第27-29页 |
| 第二章 果实成熟和品质相关基因LeETR3/Lcyb共敲除载体构建 | 第29-58页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第29-30页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第29页 |
| 2.1.2 质粒与菌株 | 第29-30页 |
| 2.2 主要设备与仪器 | 第30-31页 |
| 2.3 主要试剂 | 第31页 |
| 2.3.1 分子生物学常用酶和试剂盒 | 第31页 |
| 2.3.2 常用生化试剂 | 第31页 |
| 2.4 常用试剂与培养基的配制 | 第31-37页 |
| 2.4.1 SDS缓冲液配制 | 第31页 |
| 2.4.2 TAE缓冲液配制 | 第31-32页 |
| 2.4.3 MS常用试剂配制 | 第32-33页 |
| 2.4.4 植物组织基本培养基配方 | 第33-36页 |
| 2.4.5 LB基础培养基配方 | 第36-37页 |
| 2.5 分子实验方法 | 第37-44页 |
| 2.5.1 CRISPR/CAS9载体构建基本步骤 | 第37页 |
| 2.5.2 靶位点选择及靶点引物设计 | 第37-40页 |
| 2.5.3 质粒提取 | 第40-41页 |
| 2.5.4 表达盒与接头靶点的连接 | 第41页 |
| 2.5.5 表达盒的扩增 | 第41-42页 |
| 2.5.6 核酸检测琼脂糖凝胶电泳 | 第42页 |
| 2.5.7 产物纯化 | 第42页 |
| 2.5.8 质粒大提 | 第42-43页 |
| 2.5.9 双元载体的构建 | 第43页 |
| 2.5.10 农杆菌EHA105化转感受态的制备 | 第43-44页 |
| 2.5.11 双元载体质粒的农杆感受态的化转 | 第44页 |
| 2.6 植物组织培养方法步骤 | 第44-45页 |
| 2.6.1 发种子 | 第44页 |
| 2.6.2 洗种子 | 第44-45页 |
| 2.6.3 预培养 | 第45页 |
| 2.6.4 侵染 | 第45页 |
| 2.6.5 Kana筛选 | 第45页 |
| 2.6.6 Hyg筛选 | 第45页 |
| 2.6.7 生根 | 第45页 |
| 2.6.8 移苗 | 第45页 |
| 2.7 番茄培养条件 | 第45页 |
| 2.8 结果与分析 | 第45-56页 |
| 2.8.1 番茄目的基因靶位点的获得 | 第45-46页 |
| 2.8.2 植物表达载体CRISPR双元载体构建 | 第46-51页 |
| 2.8.3 植物表达载体在番茄中的遗传转化 | 第51-56页 |
| 2.9 结论 | 第56页 |
| 2.10 讨论与展望 | 第56-58页 |
| 第三章 猕猴桃基因MDHAR功能的初步解析 | 第58-67页 |
| 3.1 材料与方法 | 第58页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第58页 |
| 3.1.2 质粒与菌株 | 第58页 |
| 3.2 主要设备 | 第58页 |
| 3.3 主要试剂 | 第58-59页 |
| 3.3.1 常用生化试剂 | 第58页 |
| 3.3.2 抗坏血酸的测定试剂配方 | 第58-59页 |
| 3.3.3 MDHAR测定Buffer配方 | 第59页 |
| 3.4 试验方法 | 第59-62页 |
| 3.4.1 MDHAR转基因株系筛选 | 第59页 |
| 3.4.2 引物设计 | 第59-60页 |
| 3.4.3 Trizol法提取RNA | 第60页 |
| 3.4.4 mRNA反转录为cDNA | 第60-61页 |
| 3.4.5 RT-PCR分析 | 第61页 |
| 3.4.6 AsA测定 | 第61-62页 |
| 3.4.7 植物中MDHAR酶活的测定 | 第62页 |
| 3.4.8 拟南芥的培养条件 | 第62页 |
| 3.5 实验结果与分析 | 第62-65页 |
| 3.5.1 RT-PCR分析MDHAR的表达情况 | 第62-63页 |
| 3.5.2 转基因株系的MDHAR酶活测定分析 | 第63页 |
| 3.5.3 转基因株系的AsA测定分析 | 第63-65页 |
| 3.6 结论 | 第65页 |
| 3.7 讨论与展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-78页 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 | 第78-79页 |