| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 绪论 | 第7-13页 |
| 1.1 LPS的研究进展 | 第7-10页 |
| 1.1.1 LPS的结构与生物合成途径 | 第7-8页 |
| 1.1.2 LPS的免疫识别机制 | 第8-9页 |
| 1.1.3 内毒素疫苗佐剂 | 第9-10页 |
| 1.2 立题背景与意义 | 第10-12页 |
| 1.2.1 立题背景 | 第10-11页 |
| 1.2.2 立题意义 | 第11-12页 |
| 1.3 课题研究方案与目标 | 第12-13页 |
| 2 实验材料与方法 | 第13-21页 |
| 2.1 实验材料 | 第13-15页 |
| 2.1.1 实验菌株、质粒与引物 | 第13-14页 |
| 2.1.2 工具酶和主要试剂 | 第14页 |
| 2.1.3 实验仪器设备 | 第14-15页 |
| 2.2 分子实验操作 | 第15-17页 |
| 2.2.1 基本分子操作 | 第15页 |
| 2.2.2 E. coli菌株感受态细胞的制备 | 第15-16页 |
| 2.2.3 E. coli基因敲除的方法 | 第16-17页 |
| 2.3 五株基因工程菌生产的Kdo_2-lipid A的结构鉴定 | 第17-18页 |
| 2.3.1 Kdo_2-lipid A及LPS的提取与纯化制备 | 第17页 |
| 2.3.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析 | 第17-18页 |
| 2.3.3 薄层层析（TLC）分析 | 第18页 |
| 2.3.4 电喷雾电离质谱（ESI/MS, ESI/MSMS）分析 | 第18页 |
| 2.4 五株基因工程菌活菌体对细胞TLR4通路刺激能力的测定 | 第18页 |
| 2.5 五株基因工程菌生产的Kdo_2-lipid A分子的细胞免疫活性分析 | 第18-19页 |
| 2.5.1 刺激小鼠RAW264.7 细胞的免疫活性分析 | 第18-19页 |
| 2.5.2 刺激人类THP-1 细胞的免疫活性分析 | 第19页 |
| 2.6 五株基因工程菌的表型变化分析 | 第19-21页 |
| 2.6.1 生长曲线的测定 | 第19页 |
| 2.6.2 细胞表面疏水性的测定 | 第19页 |
| 2.6.3 自凝集能力的测定 | 第19-20页 |
| 2.6.4 菌膜形成能力的测定 | 第20页 |
| 2.6.5 细胞外膜渗透性的测定 | 第20页 |
| 2.6.6 抗生素最小抑菌浓度（MIC）值的测定 | 第20-21页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第21-44页 |
| 3.1 五株基因工程菌的构建与其合成的Kdo_2-lipid A分子的结构鉴定 | 第21-33页 |
| 3.1.1 BW001基因工程菌的构建与其合成的Kdo_2-lipid A分子的结构鉴定 | 第21-23页 |
| 3.1.2 BW002基因工程菌的构建与其合成的Kdo_2-lipid A分子的结构鉴定 | 第23-26页 |
| 3.1.3 BW003基因工程菌的构建与其合成的Kdo_2-lipid A分子的结构鉴定 | 第26-28页 |
| 3.1.4 BW004基因工程菌的构建与其合成的Kdo_2-lipid A分子的结构鉴定 | 第28-30页 |
| 3.1.5 BW005基因工程菌的构建与其合成的Kdo_2-lipid A分子的结构鉴定 | 第30-33页 |
| 3.2 五株新构建突变株活菌体对细胞TLR4通路刺激活性的比较与分析 | 第33-34页 |
| 3.3 五株新构建突变株合成的Kdo_2-lipid A分子细胞免疫活性的比较与分析 | 第34-39页 |
| 3.3.1 对小鼠RAW264.7 细胞免疫活性分析 | 第34-36页 |
| 3.3.2 对人类THP-1 细胞免疫活性分析 | 第36-39页 |
| 3.4 五株新构建突变株生化表型的比较与分析 | 第39-44页 |
| 3.4.1 生长曲线的比较 | 第39页 |
| 3.4.2 表面疏水性的分析 | 第39-40页 |
| 3.4.3 自凝集能力的分析 | 第40-41页 |
| 3.4.4 菌膜形成能力的分析 | 第41页 |
| 3.4.5 外膜渗透性的分析 | 第41-42页 |
| 3.4.6 抗生素抗性分析 | 第42-44页 |
| 主要结论与展望 | 第44-46页 |
| 主要结论 | 第44-45页 |
| 展望 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-50页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50页 |
