| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1 葡萄简介 | 第11-12页 |
| 2 芪类化合物简介 | 第12-13页 |
| 3 芪类化合物的生物活性 | 第13-16页 |
| 3.1 抗菌作用 | 第13-14页 |
| 3.2 抗癌作用 | 第14页 |
| 3.3 抗氧化作用 | 第14-15页 |
| 3.4 降血脂作用 | 第15-16页 |
| 4 葡萄酸腐病简介 | 第16-17页 |
| 5 本文研究的意义及内容 | 第17-19页 |
| 第二章 葡萄防御产物的分离和鉴定及关键基因克隆和分析 | 第19-41页 |
| 第一节 葡萄酸腐病防御产物的分离及鉴定 | 第19-29页 |
| 1 前言 | 第19页 |
| 2 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.2 主要试剂 | 第20页 |
| 2.3 试验材料 | 第20-21页 |
| 2.4 供式菌种 | 第21页 |
| 3 实验方法 | 第21-23页 |
| 3.1 紫檀芪对酸腐菌的体外平板抑菌实验 | 第21页 |
| 3.2 酸腐菌针刺侵染葡萄 | 第21-22页 |
| 3.3 葡萄果实中芪类化合物的提取 | 第22页 |
| 3.4 葡萄果实中的芪类化合物的鉴定 | 第22-23页 |
| 4 结果与分析 | 第23-27页 |
| 4.1 不同浓度的紫檀芪对酸腐菌的平板抑菌结果 | 第23-24页 |
| 4.2 酸腐菌侵染葡萄后腐烂情况 | 第24-25页 |
| 4.3 葡萄果实内芪类化合物的鉴定 | 第25-26页 |
| 4.4 葡萄果实内芪类化合物的含量变化 | 第26-27页 |
| 5 讨论 | 第27-29页 |
| 第二节 紫檀芪防御关键基因的克隆及分析 | 第29-41页 |
| 1 前言 | 第29页 |
| 2 实验材料 | 第29-31页 |
| 2.1 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.2 主要试剂及试剂盒 | 第30页 |
| 2.3 引物 | 第30-31页 |
| 3 实验方法 | 第31-34页 |
| 3.1 葡萄总RNA提取及第一链cDNA的合成 | 第31页 |
| 3.2 防御关键基因的扩增 | 第31-32页 |
| 3.3 回收产物的T连接及转化 | 第32-33页 |
| 3.4 重组质粒的提取、鉴定及测序分析 | 第33-34页 |
| 3.5 目的基因的序列分析 | 第34页 |
| 4 结果与分析 | 第34-36页 |
| 4.1 目的基因PCR扩增结果 | 第34-35页 |
| 4.2 目的基因的序列分析 | 第35页 |
| 4.3 氨基酸序列同源性比对 | 第35页 |
| 4.4 进化关系分析 | 第35-36页 |
| 5 讨论 | 第36-39页 |
| 6 本章小结 | 第39-41页 |
| 第三章 目的基因在酸腐菌胁迫下的表达分析及体外验证 | 第41-59页 |
| 1 前言 | 第41页 |
| 2 实验材料 | 第41-44页 |
| 2.1 主要仪器 | 第41-42页 |
| 2.2 主要试剂及试剂盒 | 第42-43页 |
| 2.3 菌株及载体 | 第43页 |
| 2.4 试验材料 | 第43页 |
| 2.5 引物 | 第43-44页 |
| 3 实验方法 | 第44-51页 |
| 3.1 酸腐菌针刺侵染葡萄 | 第44页 |
| 3.2 总RNA的提取及第一链cDNA合成 | 第44页 |
| 3.3 qRT-PCR验证WgREOM在葡萄体内防御酸腐菌的响应 | 第44-45页 |
| 3.4 数据处理 | 第45页 |
| 3.5 目的基因连接pGM-T载体及鉴定 | 第45页 |
| 3.6 真核表达载体pPIC9K-REOM的构建 | 第45-47页 |
| 3.7 重组质粒转化毕赤酵母GS115 | 第47-49页 |
| 3.8 重组酵母的诱导表达 | 第49页 |
| 3.9 表达产物的SDS-PAGE及Western blot分析 | 第49-50页 |
| 3.10 表达产物的HPLC分析 | 第50-51页 |
| 4 结果与分析 | 第51-55页 |
| 4.1 WgREOM基因在防御酸腐菌过程中的表达情况 | 第51页 |
| 4.2 重组载体pGM-T-REOM的鉴定 | 第51-52页 |
| 4.3 真核表达载体pPIC9K-REOM的鉴定 | 第52-53页 |
| 4.4 验证重组蛋白在体外酵母的表达 | 第53-54页 |
| 4.5 重组蛋白在防御中生物学功能的验证 | 第54-55页 |
| 5 讨论 | 第55-56页 |
| 6 本章小结 | 第56-59页 |
| 第四章 结论 | 第59-61页 |
| 1 主要研究成果 | 第59页 |
| 2 创新点 | 第59页 |
| 3 后续展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第75页 |
