| 目录 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-44页 |
| 1．前言 | 第16页 |
| 2．影响纯生啤酒泡沫稳定性的因素 | 第16-24页 |
| 2．1 啤酒泡沫特性 | 第16-17页 |
| 2．2 泡沫化学组成 | 第17-18页 |
| 2．3 影响熟啤酒泡沫的主要因素及影响机理 | 第18-19页 |
| 2．3．1 影响熟啤酒泡沫的主要因素 | 第18页 |
| 2．3．2 蛋白质Z及LTP1对啤酒泡沫的影响机理 | 第18-19页 |
| 2．4 影响纯生啤酒泡沫的主要因素——酵母蛋白酶A | 第19-24页 |
| 2．4．1 前蛋白酶A原、蛋白酶A原及蛋白酶A的分子生物学特征 | 第20-21页 |
| 2．4．2 酵母蛋白酶A的结构与功能 | 第21-22页 |
| 2．4．3 酵母蛋白酶A的动力学特征 | 第22-23页 |
| 2．4．4 啤酒酿造过程中影响蛋白酶A活性的因素 | 第23-24页 |
| 3．纯生啤酒泡沫稳定性的改善策略 | 第24-25页 |
| 3．1 原料选择与工艺控制 | 第24页 |
| 3．2 用抑制剂对啤酒进行后修饰 | 第24页 |
| 3．3 培育富含泡沫阳性蛋白大麦品种 | 第24页 |
| 3．4 培育酵母蛋白酶A缺陷型菌株 | 第24-25页 |
| 4．基因敲除法构建酵母蛋白酶A缺陷型菌株 | 第25-31页 |
| 4．1 反向遗传学概述 | 第25-26页 |
| 4．2 基因敲除的遗传学基础 | 第26-27页 |
| 4．3 基因敲除技术的发展及基本步骤 | 第27-31页 |
| 4．4 基因敲除技术的应用 | 第31页 |
| 4．5 前景与展望 | 第31页 |
| 5．研究现状 | 第31-32页 |
| 6．本论文研究思路 | 第32页 |
| 参考文献 | 第32-44页 |
| 第二章 酵母蛋白酶A测定方法的改进及其在纯生啤酒中的应用 | 第44-55页 |
| 1．前言 | 第44页 |
| 2．材料与方法 | 第44-46页 |
| 2．1 材料及主要试剂 | 第45页 |
| 2．2 仪器 | 第45页 |
| 2．3 实验方法 | 第45-46页 |
| 2．3．1 酵母蛋白酶A粗提液制备 | 第45页 |
| 2．3．2 底物制备方法 | 第45-46页 |
| 2．3．3 酵母蛋白酶A酶活性测定方法 | 第46页 |
| 3．结果与分析 | 第46-50页 |
| 3．1 血红蛋白为底物时酵母蛋白酶A活性的测定 | 第46-47页 |
| 3．1．1 血红蛋白为底物时酶浓度对蛋白酶A活性的影响及不同检测方法比较 | 第46-47页 |
| 3．1．2 血红蛋白为底物时底物浓度对蛋白酶A活性的影响及不同检测方法比较 | 第47页 |
| 3．2 酪蛋白为底物时酵母蛋白酶A活性的测定 | 第47-49页 |
| 3．2．1 酪蛋白为底物时酶浓度对蛋白酶A活性的影响及不同检测方法比较 | 第47-48页 |
| 3．2．2 酪蛋白为底物时底物浓度对蛋白酶A活性的影响及不同检测方法比较 | 第48-49页 |
| 3．3 不同饱和度硫酸铵盐析后酵母提取液中酵母蛋白酶A活性的比较 | 第49页 |
| 3．4 纯生啤酒在不同饱和度条件下盐析后酵母蛋白酶A活性的比较 | 第49-50页 |
| 4．讨论与结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 第三章 啤酒泡沫蛋白的电泳分离及其与酵母蛋白酶A的关系 | 第55-66页 |
| 1．前言 | 第55页 |
| 2．材料与方法 | 第55-58页 |
| 2．1 材料及主要试剂 | 第56页 |
| 2．2 仪器 | 第56页 |
| 2．3 实验方法 | 第56-58页 |
| 2．3．1 啤酒泡沫的提取 | 第56-57页 |
| 2．3．2 啤酒蛋白的电泳分离 | 第57页 |
| 2．3．3 凝胶染色 | 第57页 |
| 2．3．4 蛋白含量的测定 | 第57页 |
| 2．3．5 凝胶图象分析 | 第57页 |
| 2．3．6 酵母蛋白酶A粗提液的制备方法 | 第57-58页 |
| 2．3．7 酵母蛋白酶A粗提液对啤酒蛋白的水解作用 | 第58页 |
| 3．结果与分析 | 第58-62页 |
| 3．1 电泳染色方法比较以及电泳条件的确定 | 第58-60页 |
| 3．1．1 不同染色方法的对比 | 第58-60页 |
| 3．1．2 电泳条件的确立 | 第60页 |
| 3．2 啤酒泡沫蛋白与酵母蛋白酶A关系 | 第60-62页 |
| 4．讨论与小结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 第四章 纯生啤酒存放过程中泡沫稳定性与蛋白组成以及蛋白酶A的变化 | 第66-77页 |
| 1．前言 | 第66页 |
| 2．材料与方法 | 第66-68页 |
| 2．1 材料及主要试剂 | 第67页 |
| 2．2 主要仪器 | 第67页 |
| 2．3 实验方法 | 第67-68页 |
| 2．3．1 纯生啤酒中酵母蛋白酶A粗提液制备及酶活性测定 | 第67-68页 |
| 2．3．2 纯生啤酒存放过程中泡持时间测定 | 第68页 |
| 2．3．3 纯生啤酒存放过程中蛋白含量的测定 | 第68页 |
| 2．3．4 不同存放时间纯生啤酒泡沫蛋白的电泳分离 | 第68页 |
| 3．结果与分析 | 第68-72页 |
| 3．1 纯生啤酒存放过程中酵母蛋白酶A的变化及影响因素 | 第68-69页 |
| 3．2 纯生啤酒存放过程中泡持性与泡沫变化及影响因素 | 第69-71页 |
| 3．3 纯生啤酒存放过程中蛋白含量的变化及影响因素 | 第71-72页 |
| 3．4 纯生啤酒存放过程中蛋白组成的变化 | 第72页 |
| 4．讨论与小结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 第五章 酵母蛋白酶A的分离纯化及其对啤酒泡沫蛋白的特异性 | 第77-90页 |
| 1．前言 | 第77页 |
| 2．材料与方法 | 第77-81页 |
| 2．1 材料及主要试剂 | 第78页 |
| 2．2 仪器 | 第78-79页 |
| 2．3 实验方法 | 第79-81页 |
| 2．3．1 蛋白酶A粗提液制备 | 第79页 |
| 2．3．2 蛋白含量的测定 | 第79页 |
| 2．3．3 酶活性测定方法 | 第79页 |
| 2．3．4 凝胶层析纯化酵母蛋白酶A | 第79-80页 |
| 2．3．5 离子交换层析纯化酵母蛋白酶A | 第80页 |
| 2．3．6 纯化酵母蛋白酶A的电泳鉴定 | 第80页 |
| 2．3．7 纯化酵母蛋白酶A对啤酒蛋白的水解 | 第80-81页 |
| 3．结果与分析 | 第81-84页 |
| 3．1 蛋白酶A的分离纯化 | 第81-82页 |
| 3．2 纯化后蛋白酶A的电泳鉴定 | 第82-83页 |
| 3．3 蛋白酶A对啤酒蛋白的水解及鉴定 | 第83-84页 |
| 4．讨论与结论 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-90页 |
| 第六章 基因敲除法构建酵母蛋白酶A缺陷型菌株 | 第90-102页 |
| 1．前言 | 第90页 |
| 2．材料与方法 | 第90-95页 |
| 2．1 材料及主要试剂 | 第91-92页 |
| 2．1．1 酵母菌株及质粒 | 第91页 |
| 2．1．2 引物 | 第91页 |
| 2．1．3 培养基 | 第91页 |
| 2．1．4 工具酶和试剂 | 第91-92页 |
| 2．2 仪器 | 第92页 |
| 2．3 实验方法 | 第92-95页 |
| 2．3．1 转化DNA的合成 | 第92-93页 |
| 2．3．2 琼脂糖凝胶电泳 | 第93页 |
| 2．3．3 酵母感受态细胞的制备、转化及筛选 | 第93-94页 |
| 2．3．4 基因组DNA提取及转化菌鉴定 | 第94-95页 |
| 3．结果与讨论 | 第95-99页 |
| 3．1 转化DNA的PCR合成及电泳鉴定 | 第95-97页 |
| 3．2 转化菌筛选 | 第97页 |
| 3．3 转化菌PCR鉴定 | 第97-99页 |
| 4．结论 | 第99页 |
| 参考文献 | 第99-102页 |
| 第七章 蛋白酶A缺陷型酵母菌株及对照菌的性能比较 | 第102-114页 |
| 1．前言 | 第102页 |
| 2．材料与方法 | 第102-106页 |
| 2．1 材料及主要试剂 | 第102-103页 |
| 2．1．1 酵母菌株 | 第102页 |
| 2．1．2 培养基 | 第102-103页 |
| 2．1．3 工具酶和主要试剂 | 第103页 |
| 2．2 仪器 | 第103-104页 |
| 2．3 实验方法 | 第104-106页 |
| 2．3．1 转化菌及对照菌继代培养 | 第104页 |
| 2．3．2 转化菌PCR鉴定 | 第104页 |
| 2．3．3 蛋白酶A提取及活性测定 | 第104-105页 |
| 2．3．4 酵母菌蛋白的PAGE鉴定 | 第105页 |
| 2．3．5 转化菌遗传霉素抗性稳定性鉴定 | 第105页 |
| 2．3．6 生长性能试验 | 第105页 |
| 2．3．7 发酵力试验 | 第105-106页 |
| 2．3．8 酵母凝聚性试验 | 第106页 |
| 2．3．9 热死灭温度试验 | 第106页 |
| 3．结果与讨论 | 第106-112页 |
| 3．1 转化菌蛋白酶A缺失的遗传稳定性 | 第106-109页 |
| 3．1．1 转化菌PCR鉴定 | 第106-107页 |
| 3．1．2 蛋白酶A活性 | 第107-109页 |
| 3．1．3 酵母菌蛋白的PAGE鉴定 | 第109页 |
| 3．2 转化菌遗传霉素抗性稳定性 | 第109-110页 |
| 3．3 生长性能 | 第110-111页 |
| 3．4 发酵度与发酵速率 | 第111页 |
| 3．5 酵母凝絮性 | 第111页 |
| 3．6 热死灭温度 | 第111-112页 |
| 4．结论 | 第112页 |
| 参考文献 | 第112-114页 |
| 第八章 酵母蛋白酶A缺陷型酵母菌株啤酒酿造 | 第114-121页 |
| 1．前言 | 第114页 |
| 2．材料与方法 | 第114-116页 |
| 2．1 酵母菌株及原料 | 第114页 |
| 2．2 主要仪器 | 第114-115页 |
| 2．3 实验方法 | 第115-116页 |
| 2．3．1 扩培麦汁培养基的制备 | 第115页 |
| 2．3．2 啤酒酿造试验方法 | 第115页 |
| 2．3．3 理化指标及性能分析 | 第115-116页 |
| 2．3．4 酵母及啤酒中蛋白酶A提取及活性测定 | 第116页 |
| 2．3．5 酵母菌蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第116页 |
| 3．结果与讨论 | 第116-119页 |
| 3．1 各种理化指标测定结果 | 第116-117页 |
| 3．2 酵母菌性能测试 | 第117-118页 |
| 3．3 蛋白酶A活性测定 | 第118-119页 |
| 3．4 酵母菌蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第119页 |
| 4．小结 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-121页 |
| 第九章 主要结论 | 第121-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 个人简介及攻读博士学位期间撰写的论文 | 第124页 |
