| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 综述 | 第14-22页 |
| 1.1 牦牛乳 | 第14-15页 |
| 1.1.1 牦牛的泌乳特点 | 第14页 |
| 1.1.2 牦牛乳中与乳脂肪酸合成有关的基因 | 第14-15页 |
| 1.1.3 不同泌乳期各基因表达量的研究进展 | 第15页 |
| 1.2 EVs | 第15-17页 |
| 1.2.1 Exosomes | 第16页 |
| 1.2.2 miRNAs | 第16页 |
| 1.2.3 乳汁中miRNAs的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3 RNA的纯度及完整性的检测 | 第17-18页 |
| 1.3.1 RNA的纯度的检测方法 | 第17页 |
| 1.3.2 RNA的完整性的检测方法 | 第17-18页 |
| 1.4 乳掺假检测 | 第18-19页 |
| 1.4.1 乳掺假的检测方法 | 第18页 |
| 1.4.2 双重PCR在乳掺假检测中的应用 | 第18页 |
| 1.4.3 荧光定量PCR在乳掺假检测中的应用 | 第18-19页 |
| 1.5 转录组学测序 | 第19-20页 |
| 1.5.1 高通量测序的不同检测平台 | 第19页 |
| 1.5.2 高通量测序在miRNAs的应用 | 第19-20页 |
| 1.6 研究意义 | 第20-22页 |
| 第二章 不同的加工及处理下牦牛乳总RNA的纯度及完整性 | 第22-31页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.1 牦牛乳样品采集 | 第22页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-25页 |
| 2.2.1 牦牛乳的不同处理 | 第23页 |
| 2.2.2 牦牛乳总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.3 牦牛乳总RNA的质量浓度和纯度的测定 | 第24页 |
| 2.2.4 牦牛乳总RNA的完整性分析 | 第24页 |
| 2.2.5 牦牛乳总RNA的RT-PCR分析 | 第24页 |
| 2.2.6 总RNA测定的数据处理 | 第24-25页 |
| 2.3 结果和分析 | 第25-29页 |
| 2.3.1 加热处理后牦牛乳总RNA的质量浓度和纯度变化 | 第25页 |
| 2.3.2 不同保存时间后牦牛乳总RNA的质量浓度和纯度变化 | 第25-26页 |
| 2.3.3 不同加工形式下牦牛乳总RNA的质量浓度和纯度变化 | 第26页 |
| 2.3.4 不同加工及处理下牦牛乳总RNA的完整性检测 | 第26-27页 |
| 2.3.5 加热处理后牦牛乳总RNA的RT-PCR | 第27页 |
| 2.3.6 不同保存时间后牦牛乳总RNA的RT-PCR | 第27-28页 |
| 2.3.7 不同加工形式下牦牛乳总RNA的RT–PCR | 第28-29页 |
| 2.4 结论 | 第29页 |
| 2.5 小结 | 第29-31页 |
| 第三章 不同的加工及处理下牦牛乳外泌体RNA的完整性及基因表达分析.. | 第31-42页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第31-32页 |
| 3.1.1 牦牛乳样品采集 | 第31页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第31-32页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-34页 |
| 3.2.1 牦牛乳的不同处理 | 第32页 |
| 3.2.2 牦牛乳外泌体RNA的提取 | 第32页 |
| 3.2.3 牦牛乳外泌体RNA的RT-PCR分析 | 第32-33页 |
| 3.2.4 牦牛乳外泌体中各基因的荧光定量PCR分析 | 第33-34页 |
| 3.2.5 外泌体RNA测定的数据处理 | 第34页 |
| 3.2.6 各基因表达量的数据处理 | 第34页 |
| 3.3 结果和分析 | 第34-40页 |
| 3.3.1 加热处理后牦牛乳外泌体RNA的RIN值变化 | 第34页 |
| 3.3.2 不同保存时间后牦牛乳外泌体RNA的质量浓度和纯度变化 | 第34-35页 |
| 3.3.3 不同加工形式下牦牛乳外泌体RNA的质量浓度和纯度变化 | 第35-36页 |
| 3.3.4 不同保存时间后牦牛乳外泌体RNA的RT–PCR | 第36-38页 |
| 3.3.5 不同加工形式下牦牛乳外泌体RNA的RT-PCR | 第38页 |
| 3.3.6 不同泌乳期牦牛乳外泌体中各基因的定量分析 | 第38-40页 |
| 3.4 结论 | 第40-41页 |
| 3.5 小结 | 第41-42页 |
| 第四章 牦牛乳的掺假检测 | 第42-53页 |
| 4.1 实验材料与仪器 | 第42页 |
| 4.1.1 牦牛乳样品采集 | 第42页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第42页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-44页 |
| 4.2.1 牦牛乳和牛乳的样品处理 | 第42-43页 |
| 4.2.2 牦牛乳粉和牛乳粉的样品处理 | 第43页 |
| 4.2.3 混合乳外泌体RNA的提取 | 第43页 |
| 4.2.4 混合乳外泌体RNA的质量浓度和纯度的测定 | 第43页 |
| 4.2.5 引物设计 | 第43页 |
| 4.2.6 混合乳外泌体RNA的RT-PCR分析 | 第43-44页 |
| 4.3 结果和分析 | 第44-52页 |
| 4.3.1 BO/YA-FW和BO/YA-RV引物退火温度的确定 | 第44页 |
| 4.3.2 BO/YA-FW、BO/YA-RV和BO-FW引物的验证 | 第44-45页 |
| 4.3.3 混合乳外泌体RNA的提取及掺假检测 | 第45-47页 |
| 4.3.4 混合巴氏杀菌乳外泌体RNA的提取及掺假检测 | 第47-49页 |
| 4.3.5 混合乳粉外泌体RNA的提取及掺假检测 | 第49-52页 |
| 4.4 结论 | 第52页 |
| 4.5 小结 | 第52-53页 |
| 第五章 不同的泌乳期牦牛乳外泌体中SmallRNA的高通量测序 | 第53-78页 |
| 5.1 实验材料与仪器 | 第53页 |
| 5.1.1 牦牛乳样品采集 | 第53页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第53页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第53页 |
| 5.2 实验方法 | 第53-56页 |
| 5.2.1 牦牛乳外泌体RNA的提取 | 第53页 |
| 5.2.2 牦牛乳外泌体RNA的RIN值测定 | 第53-54页 |
| 5.2.3 文库构建、上机测序 | 第54-55页 |
| 5.2.4 测序数据的质量评估及处理 | 第55页 |
| 5.2.5 sRNA的长度筛选 | 第55页 |
| 5.2.6 参考序列比对分析 | 第55页 |
| 5.2.7 已知miRNAs分析 | 第55页 |
| 5.2.8 ncRNA分析 | 第55页 |
| 5.2.9 重复序列比对 | 第55页 |
| 5.2.10 外显子、内含子比对 | 第55页 |
| 5.2.11 新miRNAs预测 | 第55-56页 |
| 5.2.12 sRNA的分类注释统计 | 第56页 |
| 5.2.13 miRNAs的表达水平的分析 | 第56页 |
| 5.2.14 miRNAs的差异表达分析 | 第56页 |
| 5.2.15 差异miRNAs靶基因的富集分析 | 第56页 |
| 5.3 结果和分析 | 第56-76页 |
| 5.3.1 样品的RIN值检测 | 第56页 |
| 5.3.2 测序数据的质量评估及处理 | 第56-58页 |
| 5.3.3 sRNA的长度筛选 | 第58-60页 |
| 5.3.4 参考序列比对分析 | 第60页 |
| 5.3.5 已知miRNAs分析 | 第60-62页 |
| 5.3.6 ncRNA比对分析 | 第62页 |
| 5.3.7 重复序列比对 | 第62-65页 |
| 5.3.8 外显子、内含子比对 | 第65页 |
| 5.3.9 新miRNAs预测 | 第65-67页 |
| 5.3.10 sRNA的分类注释统计 | 第67-68页 |
| 5.3.11 miRNAs的表达水平的分析 | 第68-72页 |
| 5.3.12 miRNAs的差异表达分析 | 第72-74页 |
| 5.3.13 差异miRNAs靶基因的富集分析 | 第74-76页 |
| 5.4 结论 | 第76-77页 |
| 5.5 小结 | 第77-78页 |
| 结论 | 第78-80页 |
| 1 牦牛乳中RNA的完整性分析 | 第78页 |
| 2 牦牛乳的掺假检测 | 第78页 |
| 3 牦牛乳外泌体中smallRNA的高通量测序 | 第78-80页 |
| 展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 作者简介 | 第90页 |
