| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-17页 |
| 1.1 乙偶姻的概述 | 第8-9页 |
| 1.1.1 乙偶姻的理化性质 | 第8页 |
| 1.1.2 乙偶姻的用途 | 第8-9页 |
| 1.2 乙偶姻的生产方法 | 第9-10页 |
| 1.2.1 化学合成法 | 第9页 |
| 1.2.2 生物合成法 | 第9-10页 |
| 1.3 微生物发酵生产乙偶姻 | 第10-12页 |
| 1.3.1 乙偶姻的相关生产菌株 | 第10-11页 |
| 1.3.2 乙偶姻的合成代谢途径 | 第11-12页 |
| 1.4 提高乙偶姻合成效率的策略 | 第12-13页 |
| 1.4.1 高产菌株的选育 | 第12页 |
| 1.4.2 培养基成分与发酵条件优化 | 第12页 |
| 1.4.3 生产菌株的代谢工程改造 | 第12-13页 |
| 1.5 枯草芽孢杆菌芽孢合成机理概述 | 第13-15页 |
| 1.5.1 Spo0A调节蛋白在芽孢形成过程中的作用 | 第13-14页 |
| 1.5.2 σ~F和 σ~E调节因子在芽孢形成过程中的作用 | 第14页 |
| 1.5.3 芽孢形成过程 | 第14-15页 |
| 1.5.4 芽孢形成对发酵生产乙偶姻的影响 | 第15页 |
| 1.6 本论文研究意义及主要研究内容 | 第15-17页 |
| 1.6.1 研究意义 | 第15页 |
| 1.6.2 主要研究内容 | 第15-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-20页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂与培养基 | 第17-18页 |
| 2.1.3 菌株、质粒及引物 | 第18-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-24页 |
| 2.2.1 细菌基因组DNA和质粒DNA的提取 | 第20页 |
| 2.2.2 感受态细胞的制备及转化方法 | 第20页 |
| 2.2.3 目的基因的扩增及PCR产物回收 | 第20-21页 |
| 2.2.4 基因的无痕敲除方法 | 第21页 |
| 2.2.5 菌落及菌液PCR验证方法 | 第21-22页 |
| 2.2.6 不同来源启动子的克隆与重组载体的构建 | 第22页 |
| 2.2.7 乙偶姻的发酵生产实验 | 第22页 |
| 2.2.8 发酵液中芽孢的计数方法 | 第22页 |
| 2.2.9 酶活力的测定及分析 | 第22-23页 |
| 2.2.10 发酵产物的检测及分析方法 | 第23-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-44页 |
| 3.1 芽孢合成途径的阻断及其对乙偶姻合成的影响 | 第24-31页 |
| 3.1.1 芽孢产生与乙偶姻合成的相关性分析 | 第24-25页 |
| 3.1.2 spo0A基因缺失菌B. subtilis△spo0A的构建 | 第25-26页 |
| 3.1.3 sigF. sigE双基因缺失菌BSD1的的构建 | 第26-27页 |
| 3.1.4 菌株BSD1和B. subtilis△spo0A的透射电镜观察 | 第27-28页 |
| 3.1.5 spo0A基因的敲除对菌体生长及乙偶姻合成的影响 | 第28-29页 |
| 3.1.6 sigE. sigF双基因缺失菌株BSD1的生长及发酵特征研究 | 第29-31页 |
| 3.2 竞争性副产物途径的阻断及其对乙偶姻合成的影响 | 第31-38页 |
| 3.2.1 bdhA, ldh和ackA基因缺失菌株的构建及酶活测定与分析 | 第31-34页 |
| 3.2.2 bdhA基因缺失菌株BSD2的生长及发酵特征研究 | 第34-35页 |
| 3.2.3 ldh基因缺失菌株BSD3的生长及发酵特征研究 | 第35-37页 |
| 3.2.4 ackA基因缺失菌株BSD4的生长及发酵特征研究 | 第37-38页 |
| 3.3 利用发酵中后期自诱导启动子加强表达ALS和ALSD提高乙偶姻生产效率 | 第38-44页 |
| 3.3.1 重组质粒pMA5-alsSD ， pMA5-PaprE-alsSD ， pMA5-Pcry3Aa-alsSD ，pMA5-PsrfA-alsSD，pMA5-Pylb-alsSD的构建 | 第38-40页 |
| 3.3.2 重组菌株在发酵过程中ALS与ALDC酶活力的测定与分析 | 第40-41页 |
| 3.3.3 发酵中后期增强ALS和ALDC的表达对乙偶姻合成的影响 | 第41-43页 |
| 3.3.4 5L发酵罐补料-分批发酵高效合成乙偶姻 | 第43-44页 |
| 主要结论与展望 | 第44-46页 |
| 主要结论 | 第44页 |
| 展望 | 第44-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录 ：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第51页 |
