| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 熊果苷的概述 | 第8-10页 |
| 1.1.1 熊果苷的简介 | 第8页 |
| 1.1.2 α 型和 β 型熊果苷的差异 | 第8-9页 |
| 1.1.3 α-熊果苷的应用和发展现状 | 第9页 |
| 1.1.4 α-熊果苷的制备方法 | 第9-10页 |
| 1.2 环糊精葡萄糖基转移酶的概述 | 第10-12页 |
| 1.3 蔗糖磷酸化酶的概述 | 第12页 |
| 1.4 立题依据及意义 | 第12页 |
| 1.5 本论文的研究内容 | 第12-14页 |
| 第二章 材料和方法 | 第14-22页 |
| 2.1 材料 | 第14-16页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第14页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第14-15页 |
| 2.1.3 培养基 | 第15-16页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第16页 |
| 2.2 基因工程的操作方法 | 第16-18页 |
| 2.2.1 CGTase突变质粒的构建 | 第16-17页 |
| 2.2.2 蔗糖磷酸化酶基因的优化 | 第17页 |
| 2.2.3 E.coli JM109感受态细胞的转化 | 第17-18页 |
| 2.2.4 E.coli BL21(DE3)/pET-24a(+)-sp的构建 | 第18页 |
| 2.3 培养方法 | 第18页 |
| 2.3.1 重组菌的摇瓶发酵 | 第18页 |
| 2.3.2 重组菌的 3-L罐发酵培养 | 第18页 |
| 2.4 分析方法 | 第18-19页 |
| 2.4.1 生物量的测定 | 第18-19页 |
| 2.4.2 SDS-PAGE电泳分析 | 第19页 |
| 2.4.3 重组酶活的测定 | 第19页 |
| 2.5 α-熊果苷的酶转化工艺 | 第19-20页 |
| 2.5.1 CGTase催化合成 α-熊果苷 | 第19页 |
| 2.5.2 SPase催化合成 α-熊果苷 | 第19-20页 |
| 2.5.3 α-熊果苷的测定 | 第20页 |
| 2.6 α-熊果苷的纯化工艺 | 第20-22页 |
| 2.6.1 树脂的预处理 | 第20页 |
| 2.6.2 不同树脂对 α-熊果苷的吸附 | 第20-22页 |
| 第三章 结果和讨论 | 第22-45页 |
| 3.1 四种来源CGT酶制备 α-熊果苷的条件研究 | 第22-24页 |
| 3.1.1 温度对CGT酶合成 α-熊果苷的影响 | 第22-23页 |
| 3.1.2 pH对CGT酶合成 α-熊果苷的影响 | 第23页 |
| 3.1.3 HQ浓度对CGT酶合成 α-熊果苷的影响 | 第23-24页 |
| 3.2 A. gottschalkii CGTase Tyr299对合成 α-熊果苷的影响 | 第24-28页 |
| 3.2.1 A. gottschalkii CGTase突变体的获得 | 第24-25页 |
| 3.2.2 A. gottschalkii突变体Y299A的性质 | 第25-26页 |
| 3.2.3 突变体Y299A对合成 α-熊果苷的影响 | 第26-27页 |
| 3.2.4 突变体Y299A提高 α-熊果苷产量的原因探索 | 第27-28页 |
| 3.3 表达SPase的工程菌的构建及发酵条件优化 | 第28-36页 |
| 3.3.1 SPase基因的密码子优化 | 第28-29页 |
| 3.3.2 产SPase的基因工程菌的构建 | 第29-30页 |
| 3.3.3 SPase基因在重组菌中的诱导表达 | 第30-31页 |
| 3.3.4 重组SPase的高效制备 | 第31-33页 |
| 3.3.5 重组SPase的酶学性质 | 第33-36页 |
| 3.4 α-熊果苷合成的条件优化 | 第36-41页 |
| 3.4.1 pH对SPase合成 α-熊果苷的影响 | 第37页 |
| 3.4.2 反应温度对SPase合成 α-熊果苷的影响 | 第37-38页 |
| 3.4.3 供受体比例对SPase合成 α-熊果苷的影响 | 第38-39页 |
| 3.4.4 加酶量对SPase合成 α-熊果苷的影响 | 第39-40页 |
| 3.4.5 反应时间对SPase合成 α-熊果苷的影响 | 第40页 |
| 3.4.6 HQ浓度对SPase合成 α-熊果苷的影响 | 第40-41页 |
| 3.5 α-熊果苷的纯化 | 第41-45页 |
| 3.5.1 树脂的选择 | 第41页 |
| 3.5.2 α-熊果苷的最佳吸附浓度 | 第41-42页 |
| 3.5.3 α-熊果苷最佳流速的研究 | 第42页 |
| 3.5.4 α-熊果苷纯化的吸附和洗脱曲线 | 第42-43页 |
| 3.5.5 对吸附 α-熊果苷溶液树脂动态解吸曲线 | 第43-44页 |
| 3.5.6 乙醇浓度对纯化的影响 | 第44-45页 |
| 主要结论与展望 | 第45-46页 |
| 主要结论 | 第45页 |
| 展望 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53页 |
