| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 半胱氨酸蛋白酶与海参自溶 | 第9页 |
| 1.2 半胱氨酸蛋白酶及其抑制剂 | 第9-14页 |
| 1.2.1 半胱氨酸蛋白酶 | 第9-10页 |
| 1.2.2 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 | 第10-12页 |
| 1.2.2.1 简介 | 第10页 |
| 1.2.2.2 分类 | 第10-11页 |
| 1.2.2.3 半胱氨酸蛋白酶及其抑制剂的关系研究 | 第11-12页 |
| 1.2.3 半胱氨酸蛋白酶抑制剂的体内分布研究 | 第12-14页 |
| 1.2.3.1 制备重组蛋白和抗体 | 第12-13页 |
| 1.2.3.2 体内分布研究 | 第13-14页 |
| 1.3 本研究的主要内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-21页 |
| 2.1.1 实验原料 | 第15页 |
| 2.1.2 主要实验设备 | 第15-16页 |
| 2.1.3 主要实验试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第17-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-28页 |
| 2.2.1 海参体壁提取液的制备 | 第21页 |
| 2.2.2 反向明胶酶谱法检测海参内源性半胱氨酸蛋白酶抑制剂的活性 | 第21-22页 |
| 2.2.3 蛋白浓度的测定 | 第22-23页 |
| 2.2.4 明胶酶谱法检测海参半胱氨酸蛋白酶 | 第23页 |
| 2.2.5 SDS- PAGE法检测海参自溶程度 | 第23-24页 |
| 2.2.6 海参自溶过程中半胱氨酸蛋白酶抑制剂活性的变化 | 第24页 |
| 2.2.7 重组cystatin工程菌的培养和诱导 | 第24页 |
| 2.2.8 包涵体的变、复性 | 第24-25页 |
| 2.2.9 Cys-His融合蛋白的纯化 | 第25页 |
| 2.2.10 重组cystatin抗体制备 | 第25-26页 |
| 2.2.11 海参石蜡切片的制作 | 第26页 |
| 2.2.12 海参体内cystatin的免疫组织化学染色 | 第26-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-43页 |
| 3.1 反向酶谱条件优化结果 | 第28-30页 |
| 3.1.1 木瓜蛋白酶添加量 | 第28-29页 |
| 3.1.2 最适孵育p H | 第29页 |
| 3.1.3 最适合孵育温度 | 第29-30页 |
| 3.2 海参半胱氨酸蛋白酶抑制剂在自溶中的变化 | 第30-34页 |
| 3.2.1 蛋白质定量的标准曲线 | 第30-31页 |
| 3.2.2 不同贮藏温度下海参半胱氨酸蛋白酶活性的变化 | 第31页 |
| 3.2.3 不同贮藏温度下海参内源性半胱氨酸蛋白酶抑制剂的活性变化情况 | 第31-33页 |
| 3.2.4 不同贮藏温度下海参自溶情况 | 第33-34页 |
| 3.3 CYSTATIN在海参体内的分布 | 第34-43页 |
| 3.3.1 重组cystatin的表达 | 第34-35页 |
| 3.3.2 超声破碎最适菌体浓度优化 | 第35页 |
| 3.3.3 SDS-PAGE 验证洗涤效果 | 第35-36页 |
| 3.3.4 重组 cystatin 活性检测 | 第36-37页 |
| 3.3.5 重组 cystatin 蛋白最适 p H 及温度 | 第37页 |
| 3.3.6 重组 cystatin 的纯化 | 第37-38页 |
| 3.3.7 重组 cystatin 抗体制备 | 第38-39页 |
| 3.3.8 海参体壁组织中 cystatin 的免疫组织染色 | 第39-40页 |
| 3.3.9 新鲜以及自溶 48 小时海参体壁组织中 cystatin 的分布 | 第40-43页 |
| 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
