| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 前言 | 第15-36页 |
| 1 黏蛋白(mucins) | 第15-22页 |
| 1.1 黏蛋白的结构与分类 | 第15-18页 |
| 1.2 黏蛋白的合成与分泌 | 第18-19页 |
| 1.3 黏蛋白与疾病 | 第19-22页 |
| 1.3.1 囊肿纤维化症(Cystic Fibrosis,CF) | 第19页 |
| 1.3.2 粘液腺癌 | 第19-20页 |
| 1.3.3 肠道感染 | 第20-21页 |
| 1.3.4 炎症性肠病 | 第21-22页 |
| 2 O-GalNAc糖基化黏蛋白 | 第22-35页 |
| 2.1 发现与背景 | 第23-24页 |
| 2.2 O-GalNAc糖链结构 | 第24-25页 |
| 2.3 O-GalNAc糖链的释放 | 第25-28页 |
| 2.3.1 酶解法 | 第25-26页 |
| 2.3.2 肼解法 | 第26页 |
| 2.3.3 还原β消除法 | 第26-27页 |
| 2.3.4 非还原性β消除法 | 第27-28页 |
| 2.3.4.1 非还原性β消除 | 第27页 |
| 2.3.4.2 荧光标记与发色团衍生 | 第27-28页 |
| 2.4 O-GalNAc糖链的分离纯化 | 第28-30页 |
| 2.4.1 高效液相色谱法 | 第28-29页 |
| 2.4.2 凝胶过滤色谱法 | 第29页 |
| 2.4.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第29页 |
| 2.4.4 高效毛细管电泳 | 第29-30页 |
| 2.5 O-GalNAc糖链的结构解析 | 第30-32页 |
| 2.5.1 核磁共振波谱 | 第30-31页 |
| 2.5.1.1 ~1H-NMR | 第30页 |
| 2.5.1.2 ~(13)C-NMR | 第30-31页 |
| 2.5.2 质谱 | 第31-32页 |
| 2.5.2.1 电喷雾离子化质谱ESI-MS | 第31-32页 |
| 2.5.2.2 基质辅助激光解吸离子化质谱MALDI-MS | 第32页 |
| 2.6 O-GalNAc糖链的生物学作用 | 第32-35页 |
| 2.6.1 O-GalNAc糖链对蛋白结构稳定的影响 | 第33页 |
| 2.6.2 O-GalNAc糖链对生物体生长与发育的影响 | 第33页 |
| 2.6.3 O-GalNAc糖链对免疫系统的影响 | 第33-34页 |
| 2.6.4 O-GalNAc糖链与癌症的关系 | 第34-35页 |
| 3 本课题研究的目的与意义 | 第35-36页 |
| 第二章 猪小肠黏膜肝素加工废弃物中黏蛋白的提取及理化性质比较 | 第36-61页 |
| 1 仪器与材料 | 第36-37页 |
| 1.1 实验材料 | 第36页 |
| 1.2 实验试剂 | 第36页 |
| 1.3 实验仪器 | 第36-37页 |
| 2 实验方法 | 第37-45页 |
| 2.1 黏蛋白的提取 | 第37-39页 |
| 2.1.1 去除水分 | 第37页 |
| 2.1.2 热水提取黏蛋白 | 第37页 |
| 2.1.3 胰蛋白酶提取黏蛋白 | 第37-38页 |
| 2.1.4 2709碱性蛋白酶提取黏蛋白 | 第38页 |
| 2.1.5 胃蛋白酶提取黏蛋白 | 第38页 |
| 2.1.6 枯草杆菌蛋白酶提取黏蛋白 | 第38页 |
| 2.1.7 黏蛋白粗品脱盐 | 第38-39页 |
| 2.2 黏蛋白的电荷密度分析 | 第39-40页 |
| 2.3 黏蛋白的分子量测定 | 第40页 |
| 2.4 黏蛋白的理化性质分析 | 第40-42页 |
| 2.4.1 蛋白含量测定 | 第40-41页 |
| 2.4.2 总糖含量测定 | 第41页 |
| 2.4.3 糖醛酸含量测定 | 第41页 |
| 2.4.4 硫酸根含量测定 | 第41-42页 |
| 2.5 红外光谱分析 | 第42页 |
| 2.6 单糖组成分析 | 第42-43页 |
| 2.6.1 样品酸降解 | 第42-43页 |
| 2.6.2 高效薄层层析(HPTLC)分析 | 第43页 |
| 2.6.3 反相-高效液相色谱(RP-HPLC)分析 | 第43页 |
| 2.7 唾液酸含量测定 | 第43-45页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第45-59页 |
| 3.1 黏蛋白的提取 | 第45-48页 |
| 3.1.1 去除水分 | 第45页 |
| 3.1.2 热水提取黏蛋白 | 第45页 |
| 3.1.3 胰蛋白酶提取黏蛋白 | 第45-46页 |
| 3.1.4 2709碱性蛋白酶提取黏蛋白 | 第46页 |
| 3.1.5 胃蛋白酶提取黏蛋白 | 第46-47页 |
| 3.1.6 枯草杆菌蛋白酶提取熟蛋白 | 第47-48页 |
| 3.2 黏蛋白的电荷密度分析 | 第48页 |
| 3.3 黏蛋白的分子量测定 | 第48-49页 |
| 3.4 黏蛋白的理化性质分析 | 第49-53页 |
| 3.4.1 蛋白含量测定 | 第49-50页 |
| 3.4.2 总糖含量测定 | 第50-51页 |
| 3.4.3 糖醛酸含量测定 | 第51-52页 |
| 3.4.4 硫酸根含量测定 | 第52-53页 |
| 3.5 红外光谱分析 | 第53-54页 |
| 3.6 单糖组成测定 | 第54-56页 |
| 3.6.1 高效薄层层析(HPTLC)分析 | 第54-55页 |
| 3.6.2 高效液相色谱(HPLC)分析 | 第55-56页 |
| 3.7 唾液酸含量测定 | 第56-59页 |
| 4 本章小结 | 第59-61页 |
| 第三章 黏蛋白Ims-Y和Ims-YJ的分离纯化及结构表征 | 第61-95页 |
| 1 材料与仪器 | 第61-62页 |
| 1.1 实验材料 | 第61页 |
| 1.2 实验试剂 | 第61页 |
| 1.3 实验仪器 | 第61-62页 |
| 2 实验方法 | 第62-65页 |
| 2.1 黏蛋白Ims-Y和Ims-YJ的分离纯化 | 第62页 |
| 2.2 Ims-Y和Ims-YJ纯化组分的电荷密度分析 | 第62-63页 |
| 2.3 Ims-Y和Ims-YJ纯化组分的分子量测定 | 第63页 |
| 2.4 Ims-Y和Ims-YJ纯化组分的理化性质分析 | 第63页 |
| 2.5 红外光谱(IR)分析 | 第63页 |
| 2.6 单糖组成测定 | 第63页 |
| 2.7 唾液酸含量测定 | 第63页 |
| 2.8 O-糖链的释放与结构分析 | 第63-65页 |
| 2.8.1 O-糖链的释放 | 第63-64页 |
| 2.8.2 O-糖链的分离纯化 | 第64页 |
| 2.8.3 高效薄层色谱(HPTLC)分析 | 第64页 |
| 2.8.4 电喷雾离子化质谱分析 | 第64-65页 |
| 2.8.4.1 电喷雾一级质谱分析(ESI-MS) | 第64-65页 |
| 2.8.4.2 电喷雾碰撞诱导二级质谱分析(ESI-CID-MS/MS) | 第65页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第65-94页 |
| 3.1 黏蛋白Ims-Y和Ims-YJ的分离纯化 | 第65-66页 |
| 3.2 Ims-Y和Ims-YJ纯化组分的电荷密度分析 | 第66-67页 |
| 3.3 Ims-Y和Ims-YJ纯化组分的分子量测定 | 第67-68页 |
| 3.4 Ims-Y和Ims-YJ纯化组分的理化性质测定 | 第68-70页 |
| 3.5 红外光谱分析 | 第70-71页 |
| 3.6 单糖组成分析 | 第71-74页 |
| 3.6.1 高效薄层色谱(HPTLC)分析 | 第71-72页 |
| 3.6.2 高效液相色谱(HPLC)分析 | 第72-74页 |
| 3.7 唾液酸含量分析 | 第74页 |
| 3.8 O-糖链的释放与结构分析 | 第74-94页 |
| 3.8.1 O-糖链的释放 | 第74-75页 |
| 3.8.2 O-糖链的分离纯化 | 第75-76页 |
| 3.8.3 高效液相薄层色谱(HPTLC)分析 | 第76-77页 |
| 3.8.4 电喷雾离子化质谱分析 | 第77-94页 |
| 3.8.4.1 电喷雾一级质谱(ESI-MS)分析 | 第77-79页 |
| 3.8.4.2 电喷雾二级质谱(ESI-CID-MS/MS)分析 | 第79-94页 |
| 4 本章小结 | 第94-95页 |
| 第四章 猪小肠黏膜肝素加工废弃物中黏蛋白的免疫活性评价 | 第95-98页 |
| 1 材料与仪器 | 第95-96页 |
| 1.1 实验材料 | 第95页 |
| 1.2 实验试剂 | 第95页 |
| 1.3 实验仪器 | 第95-96页 |
| 2 实验方法 | 第96页 |
| 2.1 小鼠Raw 264.7巨噬细胞的培养 | 第96页 |
| 2.2 Raw264.7细胞吞噬中性红实验 | 第96页 |
| 3 实验结果 | 第96-97页 |
| 4 本章总结 | 第97-98页 |
| 结语 | 第98-100页 |
| 创新点 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-105页 |
| 附录 | 第105-106页 |
| 个人简历 | 第106页 |
| 学术成果 | 第106页 |
| 获奖情况 | 第106页 |
| 参与课题 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
