| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-22页 |
| ·引言 | 第10页 |
| ·L-2-氨基丁酸的理化性质 | 第10页 |
| ·L-2-氨基丁酸的应用 | 第10-13页 |
| ·手性化合物与食品医药 | 第10-11页 |
| ·手性药-左乙拉西坦 | 第11-12页 |
| ·手性药-盐酸乙胺丁醇 | 第12-13页 |
| ·L-2-氨基丁酸的化学合成 | 第13-14页 |
| ·酮丁酸还原法 | 第13页 |
| ·脱硫反应法 | 第13页 |
| ·氨解反应法 | 第13-14页 |
| ·卤代氨解法 | 第14页 |
| ·L-2-氨基丁酸的拆分 | 第14-15页 |
| ·化学拆分法 | 第14页 |
| ·生物酶拆分法 | 第14-15页 |
| ·非天然氨基酸的合成 | 第15-17页 |
| ·L-2-氨基丁酸的生物代谢 | 第17-20页 |
| ·L-苏氨酸的生物代谢 | 第17页 |
| ·L-苏氨酸生物代谢途径的延伸 | 第17-18页 |
| ·柠苹酸途径 | 第18-19页 |
| ·L-氨基酸的转运 | 第19-20页 |
| ·立题背景及主要内容 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-36页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第24-27页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·主要溶液 | 第26-27页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·抗生素 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-36页 |
| ·质粒的小剂量提取 | 第27页 |
| ·DNA纯化回收 | 第27页 |
| ·大肠杆菌基因组的提取 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌化学转化法感受态的制备及转化实验 | 第28页 |
| ·大肠杆菌电转化法感受态的制备及转化实验 | 第28-29页 |
| ·PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·实时定量PCR | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| ·质粒的构建 | 第31-32页 |
| ·Red同源重组技术基因敲除方法 | 第32页 |
| ·重组蛋白SDS-PAGE凝胶电泳 | 第32-33页 |
| ·亮氨酸脱氢酶活力的测定 | 第33页 |
| ·高效液相色谱法测定发酵液中的氨基酸 | 第33-34页 |
| ·高效液相色谱法测定发酵液中的有机酸 | 第34页 |
| ·大肠杆菌发酵生产L-2-氨基丁酸的培养条件及分析测定方法 | 第34-36页 |
| 3 结果与讨论 | 第36-64页 |
| ·L-2-氨基丁酸生产菌株的构建 | 第36-51页 |
| ·大肠杆菌THRD(pTrc99a-TPilvA4)和THRD(p Trc99a-ilvA)的构建 | 第36-39页 |
| ·ilvA过表达对苏氨酸转化的影响 | 第39-41页 |
| ·大肠杆菌THRB、THRG1、THRG2和THRL的构建 | 第41-45页 |
| ·大肠杆菌THRB、THRG1、THRG2和THRL的发酵实验验证 | 第45-48页 |
| ·L-2-氨基丁酸和2-酮丁酸对菌体生长的影响 | 第48-49页 |
| ·发酵过程中LeuDH酶活力的变化 | 第49-50页 |
| ·重组基因过表达对苏氨酸途径延伸代谢的影响 | 第50-51页 |
| ·大肠杆菌THRL苏氨酸转运系统的改造 | 第51-59页 |
| ·大肠杆菌THRL△rhtA、THRL△rhtC和THRL△rhtA△rhtC的构建 | 第51-54页 |
| ·rhtA和rhtC的敲除对菌株THRL生产L-2-氨基丁酸的影响 | 第54-56页 |
| ·苏氨酸转运系统的改造对菌株THRL生产L-2-氨基丁酸的影响 | 第56-57页 |
| ·大肠杆菌对L-2-氨基丁酸转运的初步研究 | 第57-59页 |
| ·柠苹酸途径的引入对菌株THRL积累L-2-氨基丁酸的影响 | 第59-63页 |
| ·大肠杆菌THRLC1和THRLC2的构建 | 第59-60页 |
| ·cimA转录水平的检测 | 第60-61页 |
| ·柠苹酸途径的引入对L-2-氨基丁酸生成积累的影响 | 第61-62页 |
| ·柠苹酸途径的引入对L-2-氨基丁酸产量影响的讨论 | 第62-63页 |
| ·总结 | 第63-64页 |
| 4 结论 | 第64-65页 |
| 5 展望 | 第65-66页 |
| 6 参考文献 | 第66-73页 |
| 7 研究生期间所发表论文情况 | 第73-74页 |
| 8 致谢 | 第74页 |
