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茎环型引物—环介导等温扩增技术检测奶粉中单增李斯特菌的研究

摘要第1-6页
Abstract第6-11页
1 引言第11-28页
   ·立题背景及意义第11-12页
   ·单增李斯特菌的简介第12-16页
     ·李斯特菌的分类第12页
     ·单增李斯特的生物学特征第12-14页
     ·抗原构造及血清型第14页
     ·单增李斯特菌的毒力因子第14-15页
     ·单增李斯特菌的流行病学特征第15-16页
   ·单增李斯特菌研究现状第16-17页
     ·传统的生化鉴定法第16页
     ·免疫学检测方法第16-17页
     ·分子生物学检测方法第17页
   ·环介导等温扩增(LAMP)技术第17-27页
     ·LAMP 法的概述第17-18页
     ·LAMP 法的特点第18-19页
     ·LAMP 法的引物设计第19-20页
     ·LAMP 法的基本原理第20-24页
     ·LAMP 反应产物的检测方法第24-25页
     ·LAMP 法的应用第25-27页
   ·研究内容第27-28页
2 材料与方法第28-39页
   ·试验材料与仪器第28-30页
     ·试验菌株第28页
     ·仪器与设备第28-29页
     ·主要培养基第29页
     ·样品与生化试剂第29-30页
   ·试验方法第30-31页
     ·菌种的培养第30页
     ·细菌DNA 模板的提取第30-31页
   ·SLP-LAMP 引物设计、反应体系和操作程序第31-33页
     ·SLP-LAMP 反应引物设计第31-32页
     ·SLP-LAMP 和PCR 反应体系第32-33页
     ·SLP-LAMP 和PCR 主要操作程序第33页
   ·SLP-LAMP 反应条件优化第33-34页
     ·适宜 Mg~(2+)浓度选择第33页
     ·dNTPs 浓度优化第33页
     ·反应温度的优化第33-34页
     ·Bst 酶的优化第34页
     ·引物对SLP-LAMP 反应的影响第34页
     ·反应时间的优化第34页
   ·SLP-LAMP 引物特异性的检测第34-35页
   ·SLP-LAMP 扩增产物的分析第35页
     ·SLP-LAMP 扩增产物可视结果分析第35页
     ·SLP-LAMP 扩增产物凝胶成像分析第35页
     ·SLP-LAMP 扩增产物酶切结果分析第35页
   ·单增李斯特菌纯培养的灵敏度检测第35页
     ·SLP-LAMP 反应的灵敏度检测第35页
     ·PCR 反应的灵敏度检测第35页
   ·人工污染奶粉中单增李斯特菌基因组DNA 提取方法的比较第35-38页
     ·普通热裂解法第36页
     ·蛋白酶K 法第36页
     ·化学试剂法第36-37页
     ·试剂盒法第37页
     ·FDA 提取DNA 法第37-38页
     ·FTA 滤膜法第38页
   ·人工污染奶粉中单增李斯特菌的检出限试验第38-39页
     ·人工污染奶粉单增李斯特菌及基因组DNA 的制备第38页
     ·SLP-LAMP 法检测人工污染单增李斯特菌样品的检出限第38页
     ·PCR 法检测人工污染单增李斯特菌样品的检出限第38-39页
3 结果与分析第39-51页
   ·SLP-LAMP 反应条件的优化第39-43页
     ·Mg~(2+)浓度的优化第39页
     ·dNTPs 浓度优化第39-40页
     ·反应温度的优化第40页
     ·Bst 酶的优化第40-41页
     ·引物对SLP-LAMP 反应的影响第41-43页
     ·反应时间的优化第43页
   ·SLP-LAMP 引物特异性的研究第43-44页
   ·SLP-LAMP 扩增产物的分析第44-46页
     ·SLP-LAMP 扩增产物的可视结果分析第44-45页
     ·SLP-LAMP 扩增产物的凝胶成像分析第45页
     ·SLP-LAMP 扩增产物酶切结果分析第45-46页
   ·单增李斯特菌纯培养灵敏度的研究第46-49页
     ·SLP-LAMP 检测单增李斯特菌的灵敏度第46-47页
     ·PCR 检测单增李斯特菌的灵敏度第47-48页
     ·人工污染奶粉中单增李斯特菌基因组DNA 提取的方法比较第48-49页
   ·人工污染奶粉中单增李斯特菌的检出限第49-51页
     ·SLP-LAMP 检测人工污染奶粉样品中单增李斯特菌的检出限第49页
     ·PCR 检测人工污染奶粉样品中单增李斯特菌的检出限第49-51页
4 讨论第51-54页
   ·环介导等温扩增(LAMP)方法检测单增李斯特菌方法学评价第51页
   ·SLP-LAMP 引物的选择第51-52页
   ·靶基因的选择第52页
   ·SLP-LAMP 反应体系的优化第52-53页
   ·SLP-LAMP 方法与PCR 方法的比较第53页
   ·LAMP 的污染防控第53-54页
5 结论第54-55页
参考文献第55-61页
硕士期间发表学术论文第61-62页
作者简介第62-63页
致谢第63-64页

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