| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 缩略语表 | 第6-11页 |
| 第1章 前言 | 第11-18页 |
| 1.1 大米过敏的危害 | 第11页 |
| 1.2 大米品种的分类 | 第11-12页 |
| 1.3 大米中蛋白的组成分类 | 第12页 |
| 1.4 大米中主要过敏蛋白 | 第12-14页 |
| 1.4.1 α-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂 | 第12-13页 |
| 1.4.2 磷脂转移蛋白 | 第13页 |
| 1.4.3 其他过敏蛋白 | 第13-14页 |
| 1.5 大米蛋白过敏反应的机制 | 第14-16页 |
| 1.5.1 IgE介导的食物过敏反应 | 第14-15页 |
| 1.5.2 非IgE介导的食物过敏反应 | 第15页 |
| 1.5.3 过敏原的检测方法 | 第15-16页 |
| 1.6 立题背景与研究内容 | 第16-18页 |
| 1.6.1 立题背景 | 第16页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第16-18页 |
| 第2章 pSUMO-M-RAG2重组质粒的构建 | 第18-30页 |
| 2.1 引言 | 第18页 |
| 2.2 实验材料 | 第18-20页 |
| 2.2.1 菌株、质粒 | 第18页 |
| 2.2.2 工具酶、分子量Marker及主要生化试剂 | 第18-19页 |
| 2.2.3 主要仪器与设备 | 第19页 |
| 2.2.4 常规培养基及溶液的配制 | 第19-20页 |
| 2.3 实验方法 | 第20-23页 |
| 2.3.1 基因合成 | 第20页 |
| 2.3.2 菌株培养 | 第20页 |
| 2.3.3 高纯度质粒小量提取方法 | 第20页 |
| 2.3.4 质粒的限制性酶切鉴定 | 第20-21页 |
| 2.3.5 核酸电泳 | 第21页 |
| 2.3.6 大肠杆菌E.coliBL21(DE3)p LysS感受态细胞的制备 | 第21-22页 |
| 2.3.7 重组质粒转化感受态细胞 | 第22-23页 |
| 2.4 结果 | 第23-27页 |
| 2.4.1 pSUMO-RAG2的构建与转化 | 第23-24页 |
| 2.4.2 pSUMO-RAG2的酶切鉴定 | 第24-25页 |
| 2.4.3 重组质粒转化感受态细胞 | 第25-26页 |
| 2.4.4 质粒提取与限制性内切酶酶切鉴定 | 第26-27页 |
| 2.5 讨论 | 第27-28页 |
| 2.5.1 大肠杆菌表达系统 | 第27-28页 |
| 2.5.2 密码子的选择 | 第28页 |
| 2.6 本章小结 | 第28-30页 |
| 第3章 重组质粒在原核系统中的表达及表达产物的纯化 | 第30-42页 |
| 3.1 引言 | 第30页 |
| 3.2 实验材料与设备 | 第30-33页 |
| 3.2.1 试剂与材料 | 第30-31页 |
| 3.2.2 仪器与设备 | 第31页 |
| 3.2.3 溶液的配制 | 第31-33页 |
| 3.2.3.1 溶解包涵体所需溶液 | 第31-32页 |
| 3.2.3.2 纯化所需溶液 | 第32页 |
| 3.2.3.3 用于测定蛋白浓度的试剂配方 | 第32页 |
| 3.2.3.4 蛋白电泳所需溶液 | 第32-33页 |
| 3.2.3.5 培养基溶液 | 第33页 |
| 3.3 实验方法 | 第33-36页 |
| 3.3.1 pSUMO-RAG2在E.coli BL21(DE3)p Lys S中的表达 | 第33页 |
| 3.3.2 样品制备 | 第33页 |
| 3.3.3 SDS-PAGE分析检测表达的融合蛋白 | 第33-34页 |
| 3.3.4 包涵体融合蛋白的可溶性表达的条件探索 | 第34-35页 |
| 3.3.4.1 不同IPTG浓度的诱导表达 | 第34页 |
| 3.3.4.2 不同温度的诱导表达 | 第34-35页 |
| 3.3.5 包涵体的变性 | 第35页 |
| 3.3.6 包涵体的复性 | 第35页 |
| 3.3.7 变复性蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| 3.3.8 变复性蛋白含量的测定 | 第36页 |
| 3.4 结果与分析 | 第36-40页 |
| 3.4.1 pSUMO-RAG2融合蛋白的SDS-PAGE分析 | 第36-37页 |
| 3.4.2 不同IPTG的浓度，温度诱导pSUMO-RAG2融合蛋白表达的结果 | 第37-39页 |
| 3.4.3 纯化后变性蛋白的SDS-PAGE分析 | 第39页 |
| 3.4.4 纯化后复性蛋白的SDS-PAGE分析 | 第39-40页 |
| 3.4.5 变性与复性蛋白的浓度 | 第40页 |
| 3.5 讨论 | 第40-41页 |
| 3.5.1 SUMO融合蛋白的表达 | 第40页 |
| 3.5.2 包涵体的变性与复性 | 第40-41页 |
| 3.6 本章小节 | 第41-42页 |
| 第4章 抗大米过敏原RAG2多克隆抗体的制备 | 第42-50页 |
| 4.1 引言 | 第42页 |
| 4.2 材料与设备 | 第42-44页 |
| 4.2.1 试剂与材料 | 第42-43页 |
| 4.2.2 主要仪器与设备 | 第43页 |
| 4.2.3 溶液的配制 | 第43-44页 |
| 4.2.3.1 生理盐水 | 第43页 |
| 4.2.3.2 间接ELISA溶液 | 第43页 |
| 4.2.3.3 蛋白免疫印迹溶液 | 第43-44页 |
| 4.3 实验方法 | 第44-46页 |
| 4.3.1 抗原的准备 | 第44页 |
| 4.3.2 免疫方案 | 第44页 |
| 4.3.3 血清的分离 | 第44页 |
| 4.3.4 最佳抗原包被浓度的确定 | 第44-45页 |
| 4.3.5 间接ELISA法检测抗体效价 | 第45页 |
| 4.3.6 免疫印迹 | 第45-46页 |
| 4.4 结果与分析 | 第46-48页 |
| 4.4.1 最佳抗原包被浓度 | 第46页 |
| 4.4.2 免疫过程中抗体效价的变化 | 第46-47页 |
| 4.4.3 Western Blotting分析检测RAG2 | 第47-48页 |
| 4.5 讨论 | 第48-49页 |
| 4.5.1 多克隆抗体的制备 | 第48页 |
| 4.5.2 兔对变性与复性蛋白的免疫应答 | 第48-49页 |
| 4.6 小结 | 第49-50页 |
| 第5章 江西主栽水稻中低抗原性大米品种的筛查 | 第50-61页 |
| 5.1 引言 | 第50页 |
| 5.2 材料与设备 | 第50-51页 |
| 5.2.1 试剂与材料 | 第50页 |
| 5.2.2 设备 | 第50-51页 |
| 5.2.3 溶液配制 | 第51页 |
| 5.2.3.1 盐溶性蛋白提取液配方 | 第51页 |
| 5.2.3.2 SDS-PAGE电泳配方 | 第51页 |
| 5.2.3.3 免疫印迹用溶液配方 | 第51页 |
| 5.2.3.4 间接竞争Elisa溶液配方 | 第51页 |
| 5.3 实验方法 | 第51-54页 |
| 5.3.1 大米盐溶性蛋白的分离提取 | 第51-52页 |
| 5.3.1.1 大米磨粉 | 第51-52页 |
| 5.3.1.2 盐溶性蛋白的提取 | 第52页 |
| 5.3.2 大米盐溶性蛋白浓度的测定 | 第52页 |
| 5.3.3 大米盐溶性蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第52-53页 |
| 5.3.4 筛查大米品种 | 第53-54页 |
| 5.3.4.1 SDS-PAGE | 第53页 |
| 5.3.4.2 免疫印迹 | 第53-54页 |
| 5.3.4.3 间接竞争Elisa | 第54页 |
| 5.4 结果与分析 | 第54-59页 |
| 5.4.1 大米盐溶性蛋白浓度的测定 | 第54-56页 |
| 5.4.2 大米盐溶性蛋白的SDS-PAGE分析 | 第56-57页 |
| 5.4.3 Western-Blotting筛查大米品种过敏原RAG2 | 第57-58页 |
| 5.4.4 间接竞争Elisa筛查低抗原性大米品种 | 第58-59页 |
| 5.5 讨论 | 第59-60页 |
| 5.5.1 大米中过敏原成份 | 第59-60页 |
| 5.5.2 不同大米品种中过敏原RAG2的含量分析 | 第60页 |
| 5.6 小结 | 第60-61页 |
| 第6章 结论与展望 | 第61-63页 |
| 6.1 结论 | 第61页 |
| 6.2 创新点 | 第61页 |
| 6.3 展望 | 第61-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第68页 |
