| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第16-25页 |
| 1.1 引言 | 第16页 |
| 1.2 苦丁茶的研究现状 | 第16-17页 |
| 1.3 苦丁茶化学成分研究进展 | 第17-20页 |
| 1.3.1 三萜及苷类化合物 | 第17-18页 |
| 1.3.2 多酚类化合物 | 第18-19页 |
| 1.3.3 黄酮类化合物 | 第19页 |
| 1.3.4 氨基酸 | 第19页 |
| 1.3.5 可溶性多糖 | 第19-20页 |
| 1.3.6 挥发性成分 | 第20页 |
| 1.4 苦丁茶的药理活性及保健作用研究 | 第20-21页 |
| 1.4.1 抗氧化作用 | 第20页 |
| 1.4.2 对心血管的作用 | 第20页 |
| 1.4.3 降血糖作用 | 第20-21页 |
| 1.4.4 抑菌作用 | 第21页 |
| 1.4.5 免疫调节功能 | 第21页 |
| 1.4.6 抗肿瘤活性 | 第21页 |
| 1.5 本课题的提出 | 第21-25页 |
| 1.5.1 研究目标 | 第21-22页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第22-23页 |
| 1.5.3 拟采取的研究方法和技术路线 | 第23-25页 |
| 第二章 苦丁茶HPLC指纹图谱初步研究 | 第25-48页 |
| 2.1 前言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第25-26页 |
| 2.2.1 试剂 | 第25页 |
| 2.2.2 仪器与设备 | 第25页 |
| 2.2.3 实验所用原材料 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-28页 |
| 2.3.1 供试品溶液的制备 | 第26页 |
| 2.3.2 实验条件优化 | 第26-27页 |
| 2.3.3 参照峰的选择 | 第27页 |
| 2.3.4 方法学考察 | 第27-28页 |
| 2.3.5 指纹图谱的建立与评价 | 第28页 |
| 2.4 结果与分析 | 第28-47页 |
| 2.4.1 提取方法的选择 | 第28页 |
| 2.4.2 提取溶剂的选择 | 第28-30页 |
| 2.4.3 超声时间的选择 | 第30-31页 |
| 2.4.4 HPLC色谱条件的选择和优化 | 第31-36页 |
| 2.4.5 参照峰的选择 | 第36-37页 |
| 2.4.6 方法学考察 | 第37-43页 |
| 2.4.7 指纹图谱的建立与评价 | 第43-47页 |
| 2.5 本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章 小分子活性物质分离纯化、鉴定及活性评价 | 第48-81页 |
| 3.1 引言 | 第48页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第48-50页 |
| 3.2.1 材料与试剂 | 第48-49页 |
| 3.2.2 仪器与设备 | 第49-50页 |
| 3.3 乙醇提取物的制备及有机溶剂分级萃取 | 第50-51页 |
| 3.3.1 乙醇粗提物的制备 | 第50页 |
| 3.3.2 分级萃取四个极性部位 | 第50-51页 |
| 3.4 活性评价 | 第51-55页 |
| 3.4.1 抗氧化活性 | 第51-53页 |
| 3.4.2 抗补体活性 | 第53页 |
| 3.4.3 抗肿瘤活性 | 第53-55页 |
| 3.5 分离纯化 | 第55-57页 |
| 3.5.1 分离纯化方法与手段 | 第55页 |
| 3.5.2 乙酸乙酯相分离纯化流程 | 第55-57页 |
| 3.6 结果与讨论 | 第57-80页 |
| 3.6.1 粗提物及其溶剂萃取组分抗氧化活性评价 | 第57-59页 |
| 3.6.2 粗提物及其溶剂萃取组分抗补体活性评价 | 第59-60页 |
| 3.6.3 粗提物及其溶剂萃取组分抗肿瘤活性评价 | 第60-61页 |
| 3.6.4 乙酸乙酯相分离得到的化合物结构鉴定 | 第61-80页 |
| 3.7 本章小结 | 第80-81页 |
| 第四章 苦丁茶单体化合物的抗肿瘤活性及作用机制研究 | 第81-106页 |
| 4.1 引言 | 第81页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第81-83页 |
| 4.2.1 材料与试剂 | 第81-83页 |
| 4.2.2 仪器与设备 | 第83页 |
| 4.3 实验方法 | 第83-93页 |
| 4.3.1 溶液的配制 | 第83-84页 |
| 4.3.2 细胞的培养 | 第84页 |
| 4.3.3 细胞形态观察及抑制率的测定 | 第84页 |
| 4.3.4 流式细胞术检测细胞周期 | 第84-85页 |
| 4.3.5 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第85页 |
| 4.3.6 细胞内活性氧ROS水平检测 | 第85-86页 |
| 4.3.7 细胞核形态观察 | 第86-87页 |
| 4.3.8 细胞线粒体跨膜电位(△Ψm)检测 | 第87页 |
| 4.3.9 RT-PCR荧光定量分析 | 第87-90页 |
| 4.3.10 Western印迹分析 | 第90-93页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第93-105页 |
| 4.4.1 单体化合物抑制不同细胞增殖的能力 | 第93-94页 |
| 4.4.2 Pomdid acid对MCF-7细胞存活率及形态学影响 | 第94-95页 |
| 4.4.3 Pomdid acid对MCF-7细胞核形态的影响 | 第95-96页 |
| 4.4.4 Pomdid acid对MCF-7细胞内ROS水平的影响 | 第96-97页 |
| 4.4.5 Pomdid acid对MCF-7细胞周期的影响 | 第97-98页 |
| 4.4.6 Pomdid acid对MCF-7细胞凋亡的影响 | 第98-99页 |
| 4.4.7 Pomdid acid对MCF-7细胞内线粒体跨膜电位的影响 | 第99-101页 |
| 4.4.8 Pomdid acid对MCF-7细胞凋亡相关基因表达的影响 | 第101-103页 |
| 4.4.9 Pomdid acid对MCF-7细胞凋亡相关蛋白表达的影响 | 第103-105页 |
| 4.5 本章小结 | 第105-106页 |
| 第五章 大孔吸附树脂对苦丁茶多酚类物质的吸附动力学与热力学研究 | 第106-141页 |
| 5.1 引言 | 第106页 |
| 5.2 实验材料与仪器 | 第106-108页 |
| 5.2.1 材料与试剂 | 第106-107页 |
| 5.2.2 仪器与设备 | 第107-108页 |
| 5.3 实验方法 | 第108-118页 |
| 5.3.1 溶液的配制 | 第108-109页 |
| 5.3.2 苦丁茶多酚提取工艺的研究与优化 | 第109-111页 |
| 5.3.3 大孔树脂吸附苦丁茶多酚类物质的动力学及热力学研究 | 第111-114页 |
| 5.3.4 苦丁茶多酚酶活性抑制研究 | 第114-115页 |
| 5.3.5 苦丁茶多酚抗氧化活性研究 | 第115-118页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第118-140页 |
| 5.4.1 绿原酸标准曲线 | 第118页 |
| 5.4.2 超声提取法单因素实验结果分析 | 第118-121页 |
| 5.4.3 超声提取法响应面实验结果分析 | 第121-125页 |
| 5.4.4 苦丁茶多酚酶活性抑制结果分析 | 第125-126页 |
| 5.4.5 清除DPPH~+自由基活性测定结果分析 | 第126-128页 |
| 5.4.6 清除ABTS~+自由基活性测定结果分析 | 第128-130页 |
| 5.4.7 总抗氧化能力测定结果分析 | 第130-132页 |
| 5.4.8 总还原力测定结果分析 | 第132页 |
| 5.4.9 苦丁茶多酚大孔树脂吸附初步研究 | 第132-140页 |
| 5.5 本章小结 | 第140-141页 |
| 第六章 苦丁茶多酚对脂多糖诱导的RAW264.7细胞抗炎机制研究 | 第141-159页 |
| 6.1 前言 | 第141页 |
| 6.2 实验材料与仪器 | 第141-143页 |
| 6.2.1 材料与试剂 | 第141-143页 |
| 6.2.2 仪器与设备 | 第143页 |
| 6.3 实验方法 | 第143-148页 |
| 6.3.1 溶液的配制 | 第143-144页 |
| 6.3.2 细胞的培养 | 第144页 |
| 6.3.3 MTT法检测苦丁茶多酚对巨噬细胞生长的影响 | 第144页 |
| 6.3.4 Griess法检测巨噬细胞释放NO | 第144-145页 |
| 6.3.5 ELISA法检测巨噬细胞分泌TNF-α、IL-6和IL-1β | 第145-146页 |
| 6.3.6 RT-PCR法检测巨噬细胞中mRNA表达 | 第146-147页 |
| 6.3.7 Western blot法检测MAPKs和NF-κB信号通路 | 第147-148页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第148-158页 |
| 6.4.1 苦丁茶多酚对巨噬细胞生长的影响 | 第148页 |
| 6.4.2 苦丁茶多酚对LPS诱导的巨噬细胞形态的影响 | 第148-149页 |
| 6.4.3 苦丁茶多酚对LPS诱导的巨噬细胞释放NO的影响 | 第149-150页 |
| 6.4.4 苦丁茶多酚对LPS诱导的巨噬细胞分泌TNF-α、IL-6和IL-1β的影响 | 第150-154页 |
| 6.4.5 苦丁茶多酚对LPS诱导的巨噬细胞相关基因表达的影响 | 第154-156页 |
| 6.4.6 苦丁茶多酚对LPS诱导的巨噬细胞MAPKs通路的影响 | 第156-157页 |
| 6.4.7 苦丁茶多酚对LPS诱导的巨噬细胞NF-κB通路的影响 | 第157-158页 |
| 6.5 本章小结 | 第158-159页 |
| 第七章 苦丁茶多糖分离纯化及免疫活性研究 | 第159-195页 |
| 7.1 引言 | 第159页 |
| 7.2 实验材料与仪器 | 第159-162页 |
| 7.2.1 材料与试剂 | 第159-161页 |
| 7.2.2 仪器与设备 | 第161-162页 |
| 7.3 实验方法 | 第162-168页 |
| 7.3.1 溶液的配制 | 第162-163页 |
| 7.3.2 苦丁茶多糖含量测定(苯酚-硫酸法) | 第163页 |
| 7.3.3 苦丁茶多糖提取工艺优化 | 第163页 |
| 7.3.4 苦丁茶多糖的分离纯化 | 第163-164页 |
| 7.3.5 理化性质的测定 | 第164-165页 |
| 7.3.6 结构分析 | 第165-167页 |
| 7.3.7 免疫活性评价 | 第167-168页 |
| 7.4 实验结果与讨论 | 第168-194页 |
| 7.4.1 苦丁茶氨基酸组成与含量分析 | 第168-169页 |
| 7.4.2 苯酚硫酸法测定葡萄糖标准曲线 | 第169页 |
| 7.4.3 单因素分析 | 第169-171页 |
| 7.4.4 响应面分析法优化工艺 | 第171-175页 |
| 7.4.5 苦丁茶多糖的提取及分离纯化流程 | 第175-176页 |
| 7.4.6 苦丁茶多糖的离子交换柱层析 | 第176-177页 |
| 7.4.7 苦丁茶多糖的分子量测定及纯度鉴定 | 第177-178页 |
| 7.4.8 苦丁茶多糖的理化性质研究 | 第178-180页 |
| 7.4.9 苦丁茶多糖的结构分析 | 第180-186页 |
| 7.4.10 苦丁茶多糖对巨噬细胞的免疫活性研究 | 第186-194页 |
| 7.5 本章小结 | 第194-195页 |
| 结论和展望 | 第195-199页 |
| 参考文献 | 第199-207页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第207-209页 |
| 致谢 | 第209-211页 |
| 附件 | 第211页 |
