| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-21页 |
| 1.1 酿酒酵母概述 | 第9页 |
| 1.2 白酒中主要风味物质概述 | 第9-11页 |
| 1.2.1 白酒的风味物质 | 第9-10页 |
| 1.2.2 高级醇对白酒风味的影响 | 第10-11页 |
| 1.3 高级醇的形成及代谢调控 | 第11-17页 |
| 1.3.1 高级醇的形成机理 | 第11-13页 |
| 1.3.2 高级醇代谢相关基因的功能 | 第13-17页 |
| 1.4 酿酒酵母高级醇代谢调控的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.4.1 诱变育种 | 第18页 |
| 1.4.2 原生质体融合 | 第18页 |
| 1.4.3 基因工程育种 | 第18-19页 |
| 1.5 本课题的立题依据及研究内容 | 第19-21页 |
| 1.5.1 本课题的立题依据 | 第19页 |
| 1.5.2 本课题的主要研究内容 | 第19-20页 |
| 1.5.3 总体研究方案 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要培养基 | 第23页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-34页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第24-27页 |
| 2.2.2 目的基因片段的获取与纯化 | 第27-30页 |
| 2.2.3 酵母的转化 | 第30页 |
| 2.2.4 突变株的验证 | 第30-31页 |
| 2.2.5 营养缺陷型的验证 | 第31页 |
| 2.2.6 Real-time PCR | 第31-33页 |
| 2.2.7 发酵实验 | 第33-34页 |
| 2.3 分析方法 | 第34-37页 |
| 2.3.1 生长曲线的测定 | 第34页 |
| 2.3.2 CO_2排放量的测定 | 第34页 |
| 2.3.3 酒精度的测定 | 第34页 |
| 2.3.4 还原糖的测定 | 第34-35页 |
| 2.3.5 总酸的测定 | 第35页 |
| 2.3.6 总酯的测定 | 第35-36页 |
| 2.3.7 高级醇和乙酸酯含量的测定 | 第36-37页 |
| 3 结果与讨论 | 第37-66页 |
| 3.1 高级醇代谢相关基因的挖掘与功能分析 | 第37-40页 |
| 3.2 硫胺素代谢相关基因敲除对酿酒酵母高级醇生成量的影响 | 第40-52页 |
| 3.2.1 胞内多片段同源重组敲除原理 | 第40页 |
| 3.2.2 硫胺素代谢基因敲除突变株的构建 | 第40-46页 |
| 3.2.3 突变株与亲本菌株生长性能的比较 | 第46-47页 |
| 3.2.4 突变株发酵性能的测定和高级醇的测定 | 第47-51页 |
| 3.2.5 小结 | 第51-52页 |
| 3.3 CHA1基因敲除对酿酒酵母高级醇生成量的影响 | 第52-57页 |
| 3.3.1 CHA1基因敲除突变株的构建 | 第52-55页 |
| 3.3.2 CHA1单敲除对生长性能的测定 | 第55页 |
| 3.3.3 CHA1基因敲除对菌株发酵性能和高级醇的测定 | 第55-56页 |
| 3.3.4 小结 | 第56-57页 |
| 3.4 AGP1基因敲除对酿酒酵母高级醇生成量的影响 | 第57-61页 |
| 3.4.1 AGP1基因敲除菌株的构建 | 第57-58页 |
| 3.4.2 AGP1基因敲除对生长性能的测定 | 第58-59页 |
| 3.4.3 AGP1基因敲除突变株发酵性能和高级醇的测定 | 第59-60页 |
| 3.4.4 小结 | 第60-61页 |
| 3.5 TIR2基因敲除对酿酒酵母高级醇生成量的影响 | 第61-66页 |
| 3.5.1 TIR2基因敲除菌株的构建 | 第61-62页 |
| 3.5.2 TIR2基因单敲除对生长性能的测定 | 第62-63页 |
| 3.5.3 TIR2基因敲除突变株发酵性能和高级醇的测定 | 第63-64页 |
| 3.5.4 小结 | 第64-66页 |
| 4 结论 | 第66-68页 |
| 4.1 全文总结 | 第66-67页 |
| 4.2 创新点 | 第67页 |
| 4.3 不足之处 | 第67-68页 |
| 5 展望 | 第68-69页 |
| 6 参考文献 | 第69-76页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第76-77页 |
| 8 致谢 | 第77页 |
