| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第12-25页 |
| 1. 多杀菌素的研究进展 | 第12-18页 |
| 1.1 生物农药简介 | 第12页 |
| 1.2 多杀菌素的发现 | 第12-13页 |
| 1.3 多杀菌素的结构 | 第13-14页 |
| 1.4 多杀菌素的性质 | 第14-15页 |
| 1.5 多杀菌素的降解 | 第15页 |
| 1.6 多杀菌素的杀虫机制 | 第15-16页 |
| 1.7 多杀菌素的合成和基因簇 | 第16-17页 |
| 1.8 多杀菌素高产菌株的选育 | 第17-18页 |
| 2. 发酵培养工艺研究 | 第18-22页 |
| 2.1 多杀菌素发酵工艺优化 | 第18-20页 |
| 2.1.1 单因子实验法 | 第19页 |
| 2.1.2 均匀设计法 | 第19页 |
| 2.1.3 正交设计法 | 第19-20页 |
| 2.1.4 Plackett-Burman实验设计 | 第20页 |
| 2.1.5 响应曲面分析法 | 第20页 |
| 2.2 多杀菌素培养基研究 | 第20-22页 |
| 2.3 多杀菌素种子培养基的研究 | 第22页 |
| 3. 多杀菌素的提取与检测 | 第22-23页 |
| 3.1 多杀菌素的提取 | 第22页 |
| 3.2 多杀菌素的分析检测 | 第22-23页 |
| 4. 本研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-35页 |
| 1. 材料 | 第25-27页 |
| 1.1 试验菌种 | 第25页 |
| 1.2 培养基与试剂 | 第25-26页 |
| 1.2.1 斜面培养基（g/L） | 第25页 |
| 1.2.2 种子培养基（g/L） | 第25页 |
| 1.2.3 发酵培养基（g/L） | 第25页 |
| 1.2.4 微量元素溶液 | 第25页 |
| 1.2.5 菌种保藏液 | 第25页 |
| 1.2.6 DNS试剂 | 第25-26页 |
| 1.2.7 2mg/m L葡萄糖标准液 | 第26页 |
| 1.2.8 DNA提取液 | 第26页 |
| 1.2.9 二苯胺-冰醋酸试剂 | 第26页 |
| 1.2.10 多杀菌素标准品 | 第26页 |
| 1.3. 主要仪器及设备 | 第26-27页 |
| 2. 方法 | 第27-35页 |
| 2.1 菌种保藏 | 第27页 |
| 2.2 种子培养 | 第27页 |
| 2.3 测定生长曲线 | 第27-28页 |
| 2.4 发酵培养 | 第28页 |
| 2.5 发酵液预处理方法 | 第28页 |
| 2.6 多杀菌素含量测定 | 第28页 |
| 2.7 还原糖的检测 | 第28-30页 |
| 2.7.1 葡萄糖标准曲线的绘制： | 第28-30页 |
| 2.7.2 发酵液中还原糖的检测： | 第30页 |
| 2.8 菌体量的间接检测法[59] | 第30-31页 |
| 2.8.1 干菌体的制备： | 第30页 |
| 2.8.2 菌体量标准曲线的绘制： | 第30-31页 |
| 2.8.3 发酵液中菌体量的检测： | 第31页 |
| 2.9 菌体干重的测定 | 第31页 |
| 2.10种子培养基优化 | 第31-32页 |
| 2.11添加不同前体物质对多杀菌素生物合成的影响 | 第32-35页 |
| 第三章 结果与分析 | 第35-58页 |
| 1. S.SPINOSA-MAR和S.SPINOS野生菌的比较 | 第35-39页 |
| 1.1 菌株菌丝形态比较 | 第35-36页 |
| 1.2 多杀菌素发酵效价的比较 | 第36-37页 |
| 1.3 多杀菌素样品的质谱分析 | 第37-38页 |
| 1.4 生长曲线的比较 | 第38页 |
| 1.5 发酵过程中pH的变化 | 第38-39页 |
| 1.6 发酵过程中还原糖的变化 | 第39页 |
| 2. S.SPINOSA-MAR种子培养条件优化 | 第39-42页 |
| 2.1 S.spinosa-Mar种子培养基优化 | 第39-41页 |
| 2.2 S.spinosa-Mar种子接种量优化 | 第41-42页 |
| 3. 添加不同前体对S.SPINOSA-MAR多杀菌素发酵效价的影响 | 第42-58页 |
| 3.1 短链脂肪酸、有机醇的单因素试验 | 第42-45页 |
| 3.1.1 丙酸钠的单因素试验 | 第42-43页 |
| 3.1.2 丙二酸的单因素试验 | 第43页 |
| 3.1.3 乙酸钠的单因素试验 | 第43-44页 |
| 3.1.4 正丁醇的单因素实验 | 第44页 |
| 3.1.5 正丙醇的单因素试验 | 第44-45页 |
| 3.2 氨基酸的单因素试验 | 第45-49页 |
| 3.2.1 甲硫氨酸的单因素试验 | 第45-46页 |
| 3.2.2 甘氨酸的单因素试验 | 第46页 |
| 3.2.3 亮氨酸的单因素试验 | 第46-47页 |
| 3.2.4 天冬氨酸的单因素试验 | 第47-48页 |
| 3.2.5 缬氨酸的单因素试验 | 第48-49页 |
| 3.2.6 异亮氨酸的单因素试验 | 第49页 |
| 3.3 正交试验 | 第49-51页 |
| 3.4 前体添加时间对多杀菌素相对产量水平的影响 | 第51-53页 |
| 3.4.1 丙酸钠的添加时间对多杀菌素发酵效价的影响 | 第51-52页 |
| 3.4.2 正丁醇的添加时间对多杀菌素相对产量水平的影响 | 第52页 |
| 3.4.3 缬氨酸的添加时间对多杀菌素相对产量水平的影响 | 第52-53页 |
| 3.5 响应曲面设计 | 第53-56页 |
| 3.5.1 响应曲面法因素与水平的选择 | 第53-54页 |
| 3.5.2 响应面分析及响应面方程的建立 | 第54-56页 |
| 3.6 添加不同前体对工程菌和野生菌发酵效价影响的比较 | 第56-58页 |
| 第四章 讨论和结论 | 第58-62页 |
| 1. 讨论 | 第58-60页 |
| 1.1 S.spinosa-Mar和S.spinosa野生菌的比较 | 第58页 |
| 1.2 种子培养条件优化 | 第58-59页 |
| 1.3 不同前体物质对多杀菌素生物合成的影响 | 第59-60页 |
| 2. 结论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 攻读硕士学位期间撰写和发表的论文 | 第68-69页 |
| 本论文感谢以下基金项目的资助 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
