| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-27页 |
| 1.1 立题背景 | 第11-12页 |
| 1.2 乳及乳制品中的嗜冷菌 | 第12-13页 |
| 1.2.1 乳中嗜冷菌 | 第12页 |
| 1.2.2 乳及乳制品中的嗜冷菌的种类 | 第12-13页 |
| 1.3 原料乳中的脂肪酶 | 第13-16页 |
| 1.3.1 原料乳中的脂蛋白脂肪酶 | 第13-14页 |
| 1.3.2 嗜冷菌分泌的脂肪酶 | 第14-16页 |
| 1.4 国内外研究现状 | 第16-22页 |
| 1.4.1 直接检测嗜冷菌相关方法 | 第16-19页 |
| 1.4.2 间接检测嗜冷菌相关方法 | 第19-21页 |
| 1.4.3 现行检测嗜冷菌方法的分析比较 | 第21-22页 |
| 1.5 单克隆抗体的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.6 本课题研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 1.7 技术路线 | 第24-25页 |
| 1.8 主要研究内容 | 第25-27页 |
| 1.8.1 荧光假单胞菌脂肪酶的分离与鉴定 | 第25页 |
| 1.8.2 Lip 小鼠免疫试验 | 第25页 |
| 1.8.3 抗 Lip 多抗制备试验 | 第25页 |
| 1.8.4 杂交瘤细胞的制备、筛选及克隆化 | 第25页 |
| 1.8.5 荧光假单胞菌脂肪酶和原料乳中的脂肪酶亲和力鉴定 | 第25-27页 |
| 第2章 材料与方法 | 第27-37页 |
| 2.1 实验材料与设备 | 第27-29页 |
| 2.1.1 实验材料及仪器 | 第27-28页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第28页 |
| 2.1.3 细胞培养溶液配方 | 第28-29页 |
| 2.2 嗜冷菌耐热性脂肪酶的分离与鉴定 | 第29-33页 |
| 2.2.1 荧光假单胞菌脂肪酶的 SDS-PAGE | 第29-30页 |
| 2.2.2 Bradford 法测定蛋白浓度 | 第30-31页 |
| 2.2.3 商品化脂肪酶的纯化 | 第31页 |
| 2.2.4 脂肪酶活力测定 | 第31-32页 |
| 2.2.5 脂肪酶酶学性质的测定 | 第32-33页 |
| 2.3 实验动物 | 第33页 |
| 2.4 荧光假单胞菌脂肪酶 LIP小鼠免疫试验 | 第33-36页 |
| 2.4.1 抗原纯化 | 第33-34页 |
| 2.4.2 免疫抗原准备 | 第34页 |
| 2.4.3 动物免疫 | 第34页 |
| 2.4.4 双向琼脂扩散法测定小鼠抗血清的效价 | 第34页 |
| 2.4.5 间接 ELISA 的方法测定小鼠抗血清效价 | 第34-35页 |
| 2.4.6 检测小鼠抗血清间接 ELISA 方法的条件选择 | 第35页 |
| 2.4.7 荧光假单胞菌脂肪酶抗血清的交叉反应 | 第35页 |
| 2.4.8 骨髓瘤细胞（SP2/0）对 HAT 培养基敏感性实验 | 第35-36页 |
| 2.4.9 分泌抗荧光假单胞菌脂肪酶单抗的杂交瘤细胞株的建立 | 第36页 |
| 2.5 数据统计与分析 | 第36-37页 |
| 第3章 荧光假单胞菌耐热性脂肪酶的分离与鉴定 | 第37-45页 |
| 3.1 BRADFORD 法测荧光假单胞菌脂肪酶含量的标准曲线 | 第37-38页 |
| 3.2 荧光假单胞菌脂肪酶的初步纯化 | 第38-39页 |
| 3.2.1 荧光假单胞菌脂肪酶样品的 SDS-PAGE 鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.2 荧光假单胞菌脂肪酶的初步纯化及纯度测定 | 第39页 |
| 3.3 脂肪酶催化活性的标准曲线 | 第39-40页 |
| 3.4 脂肪酶酶学性质的测定 | 第40-44页 |
| 3.4.1 不同温度对脂肪酶的催化活性的影响 | 第40-42页 |
| 3.4.2 不同 pH 对脂肪酶的催化活性的影响 | 第42-43页 |
| 3.4.3 不同 Ca2+浓度对脂肪酶的催化活性的影响 | 第43-44页 |
| 3.5 本章小结 | 第44-45页 |
| 第4章 荧光假单胞菌脂肪酶 LIP 抗血清的制备 | 第45-52页 |
| 4.1 抗荧光假单胞菌脂肪酶抗血清效价的确定 | 第45-47页 |
| 4.1.1 双向琼脂扩散法测定小鼠抗血清的效价 | 第45-46页 |
| 4.1.2 间接 ELISA 的方法测定小鼠抗血清效价 | 第46-47页 |
| 4.2 ELISA 法检测抗体的条件的优化 | 第47-50页 |
| 4.2.1 包被条件的优化 | 第47-48页 |
| 4.2.2 包被抗原 Lip 的浓度和抗 Lip 血清的稀释度的优化 | 第48页 |
| 4.2.3 封闭条件的优化 | 第48-49页 |
| 4.2.4 酶标二抗稀释度和作用时间的优化 | 第49-50页 |
| 4.3 抗荧光假单胞菌脂肪酶抗血清特异性鉴定 | 第50-51页 |
| 4.4 本章小结 | 第51-52页 |
| 第5章 分泌抗荧光假单胞菌脂肪酶的杂交瘤细胞株的制备 | 第52-60页 |
| 5.1 骨髓瘤细胞的准备 | 第52-54页 |
| 5.1.1 骨髓瘤细胞的复苏、培养 | 第52-53页 |
| 5.1.2 SP2/0 细胞对 HAT 培养基敏感性实验 | 第53-54页 |
| 5.2 来自于小鼠的饲养层细胞的制备 | 第54-55页 |
| 5.3 脾细胞的制备 | 第55页 |
| 5.4 细胞融合 | 第55-58页 |
| 5.5 筛选阳性融合细胞 | 第58-59页 |
| 5.6 本章小结 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
