| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 致谢 | 第9-13页 |
| 插图清单 | 第13页 |
| 表格清单 | 第13-14页 |
| 英文缩略词表 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-24页 |
| ·单核细胞增生李斯特菌概况和危害 | 第15-16页 |
| ·SELEX 技术的发展与应用 | 第16-23页 |
| ·经典 SELEX 技术及其原理 | 第16-17页 |
| ·适配子(aptamer)的优势 | 第17-20页 |
| ·影响 SELEX 筛选的因素 | 第20-21页 |
| ·经典 SELEX 技术的发展 | 第21-22页 |
| ·SELEX 的应用 | 第22-23页 |
| ·展望 | 第23-24页 |
| 第二章 随机 ssDNA 文库的 PCR 扩增条件的摸索 | 第24-32页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第24-25页 |
| ·随机 ssDNA 文库的构建、引物的设计与合成 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-26页 |
| ·PCR 扩增条件的探索 | 第25页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第25-26页 |
| ·PCR 产物的 12%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第26页 |
| ·结果 | 第26-29页 |
| ·退火温度对 PCR 扩增的影响 | 第26-27页 |
| ·循环次数对 PCR 扩增的影响 | 第27-28页 |
| ·模板量对 PCR 扩增的影响 | 第28页 |
| ·引物浓度对 PCR 扩增的影响 | 第28-29页 |
| ·Mix 含量对 PCR 扩增的影响 | 第29页 |
| ·讨论 | 第29-31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| 第三章 SELEX 技术筛选单增李斯特菌适配子方法的建立 | 第32-57页 |
| ·实验材料 | 第32-36页 |
| ·随机 ssDNA 文库的构建、引物的设计与合成 | 第32页 |
| ·单增李斯特菌悬液及反筛菌菌悬液的制备 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32-35页 |
| ·主要仪器 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-39页 |
| ·SELEX 筛选过程 | 第36-37页 |
| ·磁珠捕获法制备 ssDNA 文库 | 第37页 |
| ·SELEX 的消减筛选 | 第37-38页 |
| ·筛选的 ssDNA 文库与单增李斯特菌特异结合率的测定 | 第38页 |
| ·筛选产物的克隆 | 第38-39页 |
| ·测序 | 第39页 |
| ·适配子的软件分析 | 第39页 |
| ·结果 | 第39-53页 |
| ·SELEX 筛选过程 | 第39-41页 |
| ·筛选的 ssDNA 文库与单增李斯特菌特异结合率的测定 | 第41-42页 |
| ·克隆适配子一级结构分析 | 第42-49页 |
| ·适配子二级结构模拟分析 | 第49-53页 |
| ·讨论 | 第53-56页 |
| ·随机 ssDNA 文库及引物的设计 | 第53-54页 |
| ·文库用量和靶目标浓度的选择 | 第54页 |
| ·反向筛选对筛选结果的影响 | 第54-55页 |
| ·次级文库的制备 | 第55页 |
| ·筛选轮数的选择 | 第55页 |
| ·PCR 扩增产物的纯化 | 第55页 |
| ·适配子的一级结构 | 第55-56页 |
| ·适配子的二级结构 | 第56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 第四章 适配子的鉴定、分析与应用 | 第57-68页 |
| ·实验材料 | 第57-58页 |
| ·标记引物的合成 | 第57页 |
| ·主要试剂 | 第57-58页 |
| ·主要仪器 | 第58页 |
| ·方法 | 第58-60页 |
| ·克隆子质粒的提取 | 第58页 |
| ·地高辛标记的 ssDNA 的制备 | 第58页 |
| ·挑选的适配子与单增李斯特菌及反筛菌结合力的测定 | 第58页 |
| ·适配子 E01 和 F01 与单增李斯特菌亲和力解离常数的测定 | 第58-59页 |
| ·E01 号适配子群落的特异性检测 | 第59页 |
| ·建立荧光基团标记适配子 E01 快速鉴定单增李斯特菌的检测方法 | 第59页 |
| ·适配子 E01 的灵敏度检测比较 | 第59-60页 |
| ·结果 | 第60-66页 |
| ·挑选的适配子与单增李斯特菌及反筛菌结合力的测定结果 | 第60-61页 |
| ·适配子 E01 和 F01 与单增李斯特菌饱和力的测定结果 | 第61-62页 |
| ·E01 号适配子群落的特异性检测 | 第62-63页 |
| ·荧光显微镜观察结果 | 第63-65页 |
| ·适配子 E01 的灵敏度检测比较 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-67页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| 第五章 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第73-75页 |
