| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第11-25页 |
| 1.1 Nisin介绍 | 第11页 |
| 1.2 Nisin的结构及理化性质 | 第11-13页 |
| 1.3 Nisin的抑菌机制 | 第13-14页 |
| 1.4 Nisin的生物合成研究 | 第14-16页 |
| 1.5 Nisin生物合成有关基因的遗传分析 | 第16-19页 |
| 1.6 Nisin分子生物学及基因工程研究进展 | 第19-22页 |
| 1.7 Nisin研究的应用 | 第22-23页 |
| 1.8 选题意义、研究内容及目标 | 第23-25页 |
| 1.8.1 选题意义 | 第23页 |
| 1.8.2 研究内容 | 第23-24页 |
| 1.8.3 研究目的 | 第24-25页 |
| 第二章 NisA与nisI的克隆及工程菌的构建 | 第25-42页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 材料 | 第25-29页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第25-26页 |
| 2.2.2 培养基 | 第26页 |
| 2.2.3 溶液 | 第26-27页 |
| 2.2.4 实验试剂 | 第27-29页 |
| 2.2.5 实验仪器 | 第29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-37页 |
| 2.3.1 菌种培养及保藏 | 第29-30页 |
| 2.3.2 乳酸乳球菌基因组DNA的小量提取 | 第30页 |
| 2.3.3 碱裂解法提取大肠杆菌质粒 | 第30-31页 |
| 2.3.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.3.5 Nisin前体基因nisA、抗性基因nisI的扩增及TA克隆 | 第31-32页 |
| 2.3.6 构建载体pMG36e-nisA | 第32-33页 |
| 2.3.7 构建重组共表达载体pMG36e-nisA-nisI | 第33-36页 |
| 2.3.8 乳酸乳球菌感受态细胞的制备 | 第36页 |
| 2.3.9 乳酸乳球菌质粒DNA的提取 | 第36-37页 |
| 2.3.10 乳酸乳球菌重组菌构建 | 第37页 |
| 2.4 结果与分析 | 第37-41页 |
| 2.4.1 Nisin前体基因nisA与抗性基因nisI的扩增 | 第37-38页 |
| 2.4.2 重组质粒pMD19-nis A与pMD19-nisI的鉴定 | 第38-39页 |
| 2.4.3 重组质粒pMG36e-nisA与p MG36e-nisA-nisI的构建 | 第39-40页 |
| 2.4.4 乳酸乳球菌中重组质粒pMG36e-nisA-nis I的提取及酶切鉴定 | 第40-41页 |
| 2.5 本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 产nisin高产工程菌株的筛选 | 第42-50页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 实验材料 | 第42-43页 |
| 3.2.1 菌种 | 第42页 |
| 3.2.2 培养基 | 第42页 |
| 3.2.3 实验药品与试剂 | 第42-43页 |
| 3.2.4 主要仪器与设备 | 第43页 |
| 3.2.5 溶液的配制 | 第43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-45页 |
| 3.3.1 菌株的培养 | 第43页 |
| 3.3.2 发酵液的处理 | 第43-44页 |
| 3.3.3 发酵液中nisin效价的测定 | 第44页 |
| 3.3.4 生长曲线的测定 | 第44-45页 |
| 3.3.5 Nisin抗性的测定 | 第45页 |
| 3.3.6 菌种遗传稳定性试验 | 第45页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第45-48页 |
| 3.4.1 高产菌株的筛选 | 第45-46页 |
| 3.4.2 野生型菌株与AI-5 的生长曲线对比 | 第46页 |
| 3.4.3 Nisin抗性测定实验结果 | 第46-47页 |
| 3.4.4 菌种稳定性试验结果 | 第47-48页 |
| 3.5 本章小结 | 第48-50页 |
| 第四章 Nisin基因工程菌发酵条件与培养基的研究 | 第50-63页 |
| 4.1 引言 | 第50页 |
| 4.2 实验材料 | 第50-51页 |
| 4.2.1 菌株 | 第50页 |
| 4.2.2 培养基 | 第50-51页 |
| 4.2.3 实验试剂 | 第51页 |
| 4.2.4 实验仪器与设备 | 第51页 |
| 4.3 实验方法 | 第51-54页 |
| 4.3.1 乳酸乳球菌发酵产nisin的基本方法 | 第51页 |
| 4.3.2 发酵液中nisin效价的测定 | 第51页 |
| 4.3.3 对基因工程菌产nisin的发酵条件进行优化 | 第51-52页 |
| 4.3.4 对基因工程菌产nisin的发酵培养基进行优化 | 第52-54页 |
| 4.4 实验结果 | 第54-62页 |
| 4.4.1 对基因工程菌产nisin的发酵条件进行优化 | 第54-56页 |
| 4.4.2 对基因工程菌产nisin的发酵培养基进行优化 | 第56-61页 |
| 4.4.3 验证实验 | 第61-62页 |
| 4.4.4 最优条件下原始菌株与基因工程菌nisin产量比较 | 第62页 |
| 4.5 本章小结 | 第62-63页 |
| 第五章 结论与展望 | 第63-65页 |
| 5.1 结论 | 第63-64页 |
| 5.2 展望 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
