| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩写词表 | 第7-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-27页 |
| ·食源微生物中耐药基因的安全性问题 | 第11-17页 |
| ·食源微生物中耐药基因的存在状况 | 第11-15页 |
| ·食源微生物中耐药基因的安全性问题 | 第15-17页 |
| ·环境中的低剂量抗生素的分布 | 第17-21页 |
| ·环境中低剂量抗生素的分布 | 第17-18页 |
| ·低剂量抗生素对微生物的影响 | 第18-21页 |
| ·细菌抗性机制及抗性基因的鉴定 | 第21-25页 |
| ·耐药基因的移动机制 | 第21-22页 |
| ·细菌耐药基因快速检测技术 | 第22-25页 |
| ·本课题的研究意义及主要内容 | 第25-27页 |
| ·研究背景及意义 | 第25-26页 |
| ·主要研究内容 | 第26-27页 |
| 第二章 耐药基因快速检测平台的建立以及在食品样本检测中的应用 | 第27-37页 |
| ·引言 | 第27-28页 |
| ·实验材料与设备 | 第28-31页 |
| ·菌株和耐药质粒 | 第28页 |
| ·食品样本 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28页 |
| ·实验引物 | 第28-31页 |
| ·实验过程与方法 | 第31-32页 |
| ·样品处理 | 第31页 |
| ·耐药菌株分离培养 | 第31页 |
| ·样本及菌株DNA提取 | 第31页 |
| ·PCR方法扩增样本中的耐药基因 | 第31-32页 |
| ·LAMP方法筛查样本中的耐药基因 | 第32页 |
| ·结果与讨论 | 第32-36页 |
| ·试验结果 | 第32-34页 |
| ·食品样本中耐药菌株筛选计数 | 第32-33页 |
| ·PCR法检测食源菌中的耐药基因 | 第33-34页 |
| ·LAMP法检测食源菌中的耐药基因 | 第34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| ·本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 亚抑菌浓度抗生素刺激条件下耐药基因的水平传播规律研究 | 第37-51页 |
| ·引言 | 第37页 |
| ·实验材料与设备 | 第37-40页 |
| ·主要仪器设备 | 第37-38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·实验质粒和菌株 | 第38-39页 |
| ·常用溶液和培养基配制 | 第39-40页 |
| ·实验过程与方法 | 第40-46页 |
| ·实验流程 | 第40-41页 |
| ·试验方法 | 第41-46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-50页 |
| ·试验结果 | 第46-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| ·本章小结 | 第50-51页 |
| 第四章 亚抑菌浓度抗生素刺激下耐药基因水平传播的比较蛋白质组学研究 | 第51-72页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·实验材料与设备 | 第51-55页 |
| ·实验菌株 | 第51页 |
| ·实验试剂 | 第51-54页 |
| ·主要仪器设备 | 第54-55页 |
| ·实验过程与方法 | 第55-62页 |
| ·试验方法 | 第55-62页 |
| ·结果与讨论 | 第62-70页 |
| ·试验结果 | 第62-68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| ·本章小结 | 第70-72页 |
| 第五章 亚抑菌浓度抗生素刺激条件下耐药基因水平传播的转录水平研究 | 第72-89页 |
| ·引言 | 第72页 |
| ·实验材料与设备 | 第72-74页 |
| ·实验样品 | 第72-73页 |
| ·主要试剂 | 第73页 |
| ·主要仪器设备 | 第73-74页 |
| ·实验过程与方法 | 第74-77页 |
| ·样品RNA提取 | 第74-75页 |
| ·样品RNA琼脂糖电泳 | 第75页 |
| ·RNA的逆转录 | 第75-76页 |
| ·荧光定量PCR | 第76-77页 |
| ·数据分析与处理 | 第77页 |
| ·结果与讨论 | 第77-87页 |
| ·RNA提取结果 | 第77-78页 |
| ·荧光定量PCR特异性验证 | 第78-83页 |
| ·实时荧光定量PCR试验结果 | 第83-86页 |
| ·讨论 | 第86-87页 |
| ·本章小结 | 第87-89页 |
| 第六章 大肠杆菌耐药基因水平传播的机制研究 | 第89-120页 |
| ·引言 | 第89页 |
| ·材料与方法 | 第89-95页 |
| ·主要仪器设备 | 第89-90页 |
| ·主要试剂和耗品 | 第90页 |
| ·菌株 | 第90页 |
| ·培养基和常用溶液配制 | 第90-95页 |
| ·引物 | 第95页 |
| ·实验方法 | 第95-105页 |
| ·克隆载体pMD18-gspE和pMD18-tesB的构建 | 第95-99页 |
| ·表达载体pET19b-gspE和pET19b-tesB的构建 | 第99-100页 |
| ·E. coli GSPE-E 和E. coli TESB-E表达产物鉴定及诱导条件优化 | 第100-104页 |
| ·工程菌E. coli TESB-E和E. coli GSPE-E感受态细胞的制备 | 第104页 |
| ·R388 质粒分别转化工程菌E. coli TESB-E和E. coli GSPE-E | 第104页 |
| ·工程菌E. coli TESB-E和E. coli GSPE-E的诱导 | 第104页 |
| ·低剂量抗生素刺激条件下耐药基因水平传播实验 | 第104页 |
| ·无抗生素刺激条件下耐药基因水平传播实验 | 第104-105页 |
| ·整合效率测定 | 第105页 |
| ·结果与讨论 | 第105-118页 |
| ·克隆载体pMD18-tesB和pMD18-gspE的验证结果 | 第105-107页 |
| ·表达载体pET19b-tesB和pET19b-gspE的构建与验证 | 第107-112页 |
| ·Western blot对E. coli TESB-E 和E. coliGSPE-E表达产物鉴定及诱导条件优化 | 第112-114页 |
| ·诱导tesB基因高效表达对耐药基因水平传播效率的影响 | 第114-116页 |
| ·诱导gspE基因高效表达对接合效率的影响 | 第116-118页 |
| ·本章小结 | 第118-120页 |
| 结论与展望 | 第120-124页 |
| 结论 | 第120-122页 |
| 创新之处 | 第122-123页 |
| 展望 | 第123-124页 |
| 附录 1 | 第124-133页 |
| 附录 2 | 第133-147页 |
| 附录 3 | 第147-148页 |
| 附录 4 | 第148-149页 |
| 附录 5 | 第149-150页 |
| 附录 6 | 第150-151页 |
| 参考文献 | 第151-163页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第163-166页 |
| 致谢 | 第166-168页 |
| 附件 | 第168页 |
