酶解处理对虾致敏蛋白的致敏性影响分析
| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-16页 |
| 1 绪论 | 第16-27页 |
| ·食物过敏 | 第16-20页 |
| ·食物过敏流行病学研究 | 第16-17页 |
| ·食物过敏致敏过程 | 第17-19页 |
| ·食物过敏的临床疾病、诊断及治疗 | 第19-20页 |
| ·食品致敏原 | 第20-25页 |
| ·食品致敏原分类 | 第20-22页 |
| ·食品致敏原研究进展 | 第22页 |
| ·致敏原的动物模型评价体系 | 第22-23页 |
| ·虾致敏蛋白研究进展 | 第23-25页 |
| ·研究意义和内容 | 第25-26页 |
| ·本文技术路线 | 第26-27页 |
| 2 虾主要致敏蛋白提取纯化方法的优化及鉴定 | 第27-38页 |
| ·材料与仪器 | 第27-28页 |
| ·实验仪器 | 第27页 |
| ·实验材料 | 第27页 |
| ·实验试剂 | 第27页 |
| ·主要溶液配制 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-31页 |
| ·虾致敏蛋白粗提取条件优化 | 第28-29页 |
| ·虾致敏蛋白的分离纯化 | 第29页 |
| ·SDS-PAGE分析虾致敏蛋白 | 第29-30页 |
| ·Bradford法测定粗提液浓度 | 第30-31页 |
| ·质谱鉴定虾致敏蛋白 | 第31页 |
| ·Western Blotting鉴定虾致敏蛋白 | 第31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-37页 |
| ·虾致敏蛋白粗提取 | 第31-33页 |
| ·虾致敏蛋白分离条件优化 | 第33-36页 |
| ·虾致敏蛋白质质谱鉴定结果 | 第36页 |
| ·Western Blotting鉴定虾致敏蛋白 | 第36-37页 |
| ·小结 | 第37-38页 |
| 3 虾致敏蛋白多克隆抗体制备 | 第38-45页 |
| ·仪器与试剂 | 第38-39页 |
| ·实验仪器 | 第38页 |
| ·实验材料 | 第38页 |
| ·耗材试剂 | 第38页 |
| ·主要溶液配制 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-41页 |
| ·切胶回收高度纯度Pen a 1 | 第39页 |
| ·回收Pen a 1 纯度测定 | 第39页 |
| ·虾致敏蛋白多克隆抗体制备 | 第39页 |
| ·Protein A柱纯化多抗血清 | 第39-40页 |
| ·ELISA法测定虾致敏蛋白多抗效价 | 第40页 |
| ·包被原和多抗最佳工作浓度确定 | 第40页 |
| ·虾致敏蛋白多克隆抗体灵敏度的测定 | 第40-41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-44页 |
| ·切胶回收Pen a 1 效果 | 第41页 |
| ·Pen a 1 纯度分析 | 第41-42页 |
| ·虾致敏蛋白多抗效价测定结果 | 第42页 |
| ·虾致敏蛋白和多抗最佳工作浓度测定结果 | 第42-43页 |
| ·虾致敏蛋白多克隆抗体灵敏度的测定结果 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 4 虾致敏蛋白的酶解处理及其结构变化 | 第45-56页 |
| ·仪器与试剂 | 第45页 |
| ·实验仪器 | 第45页 |
| ·材料药品 | 第45页 |
| ·试剂配制 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-48页 |
| ·酶活测定 | 第45-46页 |
| ·酶解虾致敏蛋白最优酶的筛选 | 第46-47页 |
| ·OPA法测定水解度 | 第47页 |
| ·碱性蛋白酶单因素优化 | 第47页 |
| ·正交试验优化碱性蛋白酶酶解条件 | 第47-48页 |
| ·酶解蛋白抑制率测定方法 | 第48页 |
| ·CD光谱测定虾致敏蛋白二级结构变化 | 第48页 |
| ·结果与讨论 | 第48-54页 |
| ·酶活测定结果 | 第48页 |
| ·多种蛋白酶酶解虾致敏蛋白效果 | 第48-50页 |
| ·碱性蛋白酶水解虾致敏蛋白单因素优化结果 | 第50-51页 |
| ·碱性蛋白酶正交试验优化结果 | 第51-52页 |
| ·酶解蛋白的CD光谱分析 | 第52-54页 |
| ·小结 | 第54-56页 |
| 5 小鼠模型评价酶解蛋白的致敏性 | 第56-65页 |
| ·仪器与试剂 | 第56页 |
| ·实验仪器 | 第56页 |
| ·实验材料 | 第56页 |
| ·实验试剂 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-58页 |
| ·虾蛋白小鼠致敏模型的建立 | 第56-57页 |
| ·小鼠过敏症状观察 | 第57页 |
| ·小鼠sIgG、IgE水平测定 | 第57页 |
| ·小鼠组胺含量的测定 | 第57-58页 |
| ·小鼠脾指数计算 | 第58页 |
| ·小鼠空肠病理切片观察 | 第58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-63页 |
| ·小鼠过敏症状观察结果 | 第58-59页 |
| ·小鼠sIgG测定结果 | 第59页 |
| ·小鼠s IgE测定结果 | 第59-60页 |
| ·小鼠组胺测定结果 | 第60-61页 |
| ·小鼠脾指数计算结果 | 第61-62页 |
| ·小鼠肠切片H&E染色观察 | 第62-63页 |
| ·小结 | 第63-65页 |
| 6 结论和展望 | 第65-66页 |
| ·主要结论 | 第65页 |
| ·不足 | 第65页 |
| ·展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 主要缩略词表 | 第73-74页 |
| 作者简历 | 第74页 |
