| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-19页 |
| 1.1 透明质酸概述 | 第9-10页 |
| 1.1.1 透明质酸的性质 | 第9页 |
| 1.1.2 透明质酸的来源 | 第9页 |
| 1.1.3 透明质酸的主要用途 | 第9-10页 |
| 1.2 低分子量和寡聚透明质酸的概述 | 第10-13页 |
| 1.2.1 低分子量和寡聚透明质酸的性质 | 第10页 |
| 1.2.2 LMWHA和o-HA的生物活性 | 第10-11页 |
| 1.2.3 LMWHA和o-HA的制备方法研究 | 第11-12页 |
| 1.2.4 寡糖的分离与纯化方法 | 第12-13页 |
| 1.3 透明质酸酶 | 第13-17页 |
| 1.3.1 透明质酸酶的分类 | 第13-16页 |
| 1.3.2 微生物透明质酸酶酶解机制 | 第16-17页 |
| 1.4 本论文研究内容及意义 | 第17-19页 |
| 1.4.1 本论文研究意义 | 第17-18页 |
| 1.4.2 本论文研究内容 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 菌种及质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 工具酶、抗生素及相关试剂 | 第19-21页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第21-22页 |
| 2.1.4 培养基和主要溶液 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-40页 |
| 2.2.1 兽疫链球菌基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2 表达载体pET28a-hylb的构建 | 第24-30页 |
| 2.2.3 透明质酸裂解酶Hy1B的诱导表达及纯化 | 第30-33页 |
| 2.2.4 透明质酸裂解酶酶学性质分析 | 第33-34页 |
| 2.2.5 透明质酸裂解酶酶活测定 | 第34-35页 |
| 2.2.6 低分子量透明质酸的制备 | 第35-37页 |
| 2.2.7 透明质酸寡糖的制备 | 第37-40页 |
| 3 结果与讨论 | 第40-66页 |
| 3.1 兽疫链球菌hylb基因分析及蛋白功能域 | 第40-42页 |
| 3.1.1 透明质酸裂解酶基因信息 | 第40-41页 |
| 3.1.2 蛋白功能域 | 第41页 |
| 3.1.3 蛋白三维结构模拟 | 第41-42页 |
| 3.2 透明质酸裂解酶表达载体的构建 | 第42-46页 |
| 3.2.1 兽疫链球菌ATCC39920基因组的提取 | 第42-43页 |
| 3.2.2 表达载体的构建流程 | 第43页 |
| 3.2.3 目的基因hylb的扩增 | 第43-44页 |
| 3.2.4 重组质粒pET28a-hylb的验证 | 第44-45页 |
| 3.2.5 透明质酸裂解酶表达菌株S193的构建 | 第45-46页 |
| 3.3 透明质酸裂解酶的表达与纯化 | 第46-49页 |
| 3.3.1 透明质酸裂解酶诱导温度的选择 | 第46页 |
| 3.3.2 透明质酸裂解酶IPTG诱导浓度的选择 | 第46-47页 |
| 3.3.3 透明质酸裂解酶的纯化 | 第47-48页 |
| 3.3.4 Western -Blot检测蛋白表达 | 第48-49页 |
| 3.4 透明质酸裂解酶酶学性质分析 | 第49-51页 |
| 3.4.1 透明质酸裂解酶最适反应温度测定 | 第49页 |
| 3.4.2 透明质酸裂解酶最适反应pH测定 | 第49-50页 |
| 3.4.3 金属离子对酶活力的影响 | 第50页 |
| 3.4.4 透明质酸裂解酶半衰期测定 | 第50-51页 |
| 3.5 透明质酸裂解酶酶活力的测定 | 第51-52页 |
| 3.5.1 透明圈法测定透明质酸裂解酶酶活力 | 第51页 |
| 3.5.2 Morgan-Elson法测透明质酸裂解酶酶活 | 第51-52页 |
| 3.6 酶解法制备低分子量透明质酸 | 第52-58页 |
| 3.6.1 无水乙醇沉淀透明质酸 | 第52-53页 |
| 3.6.2 样品蛋白含量测定 | 第53页 |
| 3.6.3 低分子量透明质酸分子量测定 | 第53-54页 |
| 3.6.4 琼脂糖凝胶电泳法分析透明质酸分子量 | 第54-55页 |
| 3.6.5 样品的光谱分析 | 第55-58页 |
| 3.7 透明质酸寡糖的制备 | 第58-66页 |
| 3.7.1 透明质酸二糖的制备 | 第58-59页 |
| 3.7.2 其它聚合度透明质酸寡糖的制备 | 第59-66页 |
| 4 结论 | 第66-67页 |
| 5 展望 | 第67-68页 |
| 6 参考文献 | 第68-74页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第74-75页 |
| 8 致谢 | 第75页 |
