中文摘要 | 第7-9页 |
ABSTRACT | 第9-11页 |
符号说明 | 第12-13页 |
第一章 前言 | 第13-24页 |
1.1 转基因技术与转基因植物的诞生 | 第13-14页 |
1.2 转基因作物的种植概况 | 第14-15页 |
1.3 转基因玉米的研究现状 | 第15页 |
1.4 作物转基因的检测方法 | 第15-22页 |
1.4.1 核酸水平检测方法 | 第16-19页 |
1.4.2 蛋白水平的检测方法 | 第19-21页 |
1.4.3 其他检测方法 | 第21-22页 |
1.5 转基因植物的安全性评价 | 第22-23页 |
1.6 本研究的目的、意义与研究内容 | 第23-24页 |
第二章 实验材料与方法 | 第24-39页 |
2.1 实验材料 | 第24页 |
2.2 仪器、耗材和试剂 | 第24-25页 |
2.2.1 实验仪器 | 第24-25页 |
2.2.2 实验耗材 | 第25页 |
2.2.3 实验试剂及药品 | 第25页 |
2.3 实验方法 | 第25-38页 |
2.3.1 玉米三叶期除草剂喷施筛选 | 第25-26页 |
2.3.2 CTAB法小量提取玉米基因组DNA | 第26页 |
2.3.3 CTAB法大量提取玉米基因组DNA | 第26-28页 |
2.3.4 玉米转基因PCR检测 | 第28-29页 |
2.3.5 DNA片段回收 | 第29页 |
2.3.6 重组质粒转化以及单克隆挑取和质粒提取 | 第29-30页 |
2.3.7 Southern blot杂交探针的制备和标记效率的检测 | 第30-32页 |
2.3.8 Southern blot杂交检测 | 第32-35页 |
2.3.9 玉米材料RNA提取 | 第35-36页 |
2.3.10 cDNA第一链的合成 | 第36页 |
2.3.11 实时荧光定量PCR检测 | 第36页 |
2.3.12 玉米材料蛋白提取 | 第36-37页 |
2.3.13 蛋白定量标准曲线制作 | 第37页 |
2.3.14 侧流式转基因检测试纸条检测筛选标记基因bar | 第37页 |
2.3.15 抗体制备 | 第37页 |
2.3.16 ELISA标准曲线的制作 | 第37-38页 |
2.3.17 利用间接ELISA检测转基因材料目的蛋白含量 | 第38页 |
2.4 数据处理方法 | 第38-39页 |
第三章 实验结果与分析 | 第39-57页 |
3.1 转基因玉米除草剂草丁膦筛选 | 第39-40页 |
3.2 转基因玉米的PCR检测结果 | 第40-41页 |
3.3 PCR产物测序分析 | 第41-42页 |
3.4 Southern blot杂交检测转基因玉米材料 | 第42-50页 |
3.4.1 杂交探针标记效率的检测 | 第42-43页 |
3.4.2 CTAB法大量提取高质量玉米基因组DNA | 第43-45页 |
3.4.3 基因组DNA限制性内切酶消化 | 第45-46页 |
3.4.4 Southern blot杂交及结果分析 | 第46-50页 |
3.5 实时荧光定量PCR检测转基因Zmda1和ZmbZIP4的表达 | 第50-52页 |
3.6 侧流式试纸条结果 | 第52-53页 |
3.7 ELISA检测结果 | 第53-57页 |
3.7.1 考马斯亮蓝G250蛋白质定量标准曲线 | 第53-54页 |
3.7.2 ELISA检测标准曲线 | 第54-55页 |
3.7.3 ELISA检测ZmbZIP4蛋白 | 第55-57页 |
第四章 分析与讨论 | 第57-62页 |
4.1 玉米转基因核酸水平检测方法的注意事项 | 第57-60页 |
4.1.1 普通定性PCR检测及相关步骤优化 | 第57-58页 |
4.1.2 Southern blot杂交鉴定 | 第58-60页 |
4.1.3 real-time RT-PCR | 第60页 |
4.2 玉米转基因编码蛋白检测方法的比较 | 第60-62页 |
4.2.1 外源目的蛋白的检测 | 第60-61页 |
4.2.2 内源目的蛋白的检测 | 第61-62页 |
参考文献 | 第62-68页 |
致谢 | 第68-69页 |
攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第69-70页 |
学位论文评阅及答辩情况表 | 第70页 |