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转基因玉米检测及方法优化

中文摘要第7-9页
ABSTRACT第9-11页
符号说明第12-13页
第一章 前言第13-24页
    1.1 转基因技术与转基因植物的诞生第13-14页
    1.2 转基因作物的种植概况第14-15页
    1.3 转基因玉米的研究现状第15页
    1.4 作物转基因的检测方法第15-22页
        1.4.1 核酸水平检测方法第16-19页
        1.4.2 蛋白水平的检测方法第19-21页
        1.4.3 其他检测方法第21-22页
    1.5 转基因植物的安全性评价第22-23页
    1.6 本研究的目的、意义与研究内容第23-24页
第二章 实验材料与方法第24-39页
    2.1 实验材料第24页
    2.2 仪器、耗材和试剂第24-25页
        2.2.1 实验仪器第24-25页
        2.2.2 实验耗材第25页
        2.2.3 实验试剂及药品第25页
    2.3 实验方法第25-38页
        2.3.1 玉米三叶期除草剂喷施筛选第25-26页
        2.3.2 CTAB法小量提取玉米基因组DNA第26页
        2.3.3 CTAB法大量提取玉米基因组DNA第26-28页
        2.3.4 玉米转基因PCR检测第28-29页
        2.3.5 DNA片段回收第29页
        2.3.6 重组质粒转化以及单克隆挑取和质粒提取第29-30页
        2.3.7 Southern blot杂交探针的制备和标记效率的检测第30-32页
        2.3.8 Southern blot杂交检测第32-35页
        2.3.9 玉米材料RNA提取第35-36页
        2.3.10 cDNA第一链的合成第36页
        2.3.11 实时荧光定量PCR检测第36页
        2.3.12 玉米材料蛋白提取第36-37页
        2.3.13 蛋白定量标准曲线制作第37页
        2.3.14 侧流式转基因检测试纸条检测筛选标记基因bar第37页
        2.3.15 抗体制备第37页
        2.3.16 ELISA标准曲线的制作第37-38页
        2.3.17 利用间接ELISA检测转基因材料目的蛋白含量第38页
    2.4 数据处理方法第38-39页
第三章 实验结果与分析第39-57页
    3.1 转基因玉米除草剂草丁膦筛选第39-40页
    3.2 转基因玉米的PCR检测结果第40-41页
    3.3 PCR产物测序分析第41-42页
    3.4 Southern blot杂交检测转基因玉米材料第42-50页
        3.4.1 杂交探针标记效率的检测第42-43页
        3.4.2 CTAB法大量提取高质量玉米基因组DNA第43-45页
        3.4.3 基因组DNA限制性内切酶消化第45-46页
        3.4.4 Southern blot杂交及结果分析第46-50页
    3.5 实时荧光定量PCR检测转基因Zmda1和ZmbZIP4的表达第50-52页
    3.6 侧流式试纸条结果第52-53页
    3.7 ELISA检测结果第53-57页
        3.7.1 考马斯亮蓝G250蛋白质定量标准曲线第53-54页
        3.7.2 ELISA检测标准曲线第54-55页
        3.7.3 ELISA检测ZmbZIP4蛋白第55-57页
第四章 分析与讨论第57-62页
    4.1 玉米转基因核酸水平检测方法的注意事项第57-60页
        4.1.1 普通定性PCR检测及相关步骤优化第57-58页
        4.1.2 Southern blot杂交鉴定第58-60页
        4.1.3 real-time RT-PCR第60页
    4.2 玉米转基因编码蛋白检测方法的比较第60-62页
        4.2.1 外源目的蛋白的检测第60-61页
        4.2.2 内源目的蛋白的检测第61-62页
参考文献第62-68页
致谢第68-69页
攻读学位期间发表的学术论文目录第69-70页
学位论文评阅及答辩情况表第70页

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