| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1. 引言 | 第13-26页 |
| 1.1 一氧化氮 | 第13-14页 |
| 1.2 蛋白质巯基的亚硝基化 | 第14-16页 |
| 1.2.1 蛋白质巯基的亚硝基化修饰 | 第14页 |
| 1.2.2 蛋白质巯基亚硝基化修饰与疾病 | 第14-15页 |
| 1.2.3 机体调节亚硝基化的机制 | 第15页 |
| 1.2.4 蛋白质巯基亚硝基化靶点和功能的研究 | 第15-16页 |
| 1.3 表面等离子体共振技术（SPR） | 第16-18页 |
| 1.3.1 SPR发展概述 | 第16页 |
| 1.3.2 SPR传感器芯片 | 第16页 |
| 1.3.3 SPR传感器特点 | 第16-17页 |
| 1.3.4 SPR传感器应用 | 第17-18页 |
| 1.4 硫氧还蛋白 | 第18-21页 |
| 1.4.1 硫氧还蛋白（Trx）的结构特点与硫氧还蛋白系统 | 第18页 |
| 1.4.2 Trx的类型和组织分布 | 第18-19页 |
| 1.4.3 Trx的功能 | 第19-20页 |
| 1.4.4 线粒体硫氧还蛋白系统 | 第20-21页 |
| 1.4.5 Trx的表达 | 第21页 |
| 1.5 ROS与植物抗氧化系统 | 第21-24页 |
| 1.5.1 线粒体内的活性氧 | 第21-22页 |
| 1.5.2 植物抗氧化酶与抗氧化系统 | 第22-24页 |
| 1.6 研究内容及意义 | 第24-26页 |
| 2. 材料与方法 | 第26-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 样品处理 | 第26页 |
| 2.1.2 线粒体的提取 | 第26页 |
| 2.1.3 线粒体的纯化 | 第26-27页 |
| 2.2 实验仪器与试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第27-28页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第28页 |
| 2.3 实验所用溶液配制 | 第28-30页 |
| 2.4 SPR传感器表征 | 第30-31页 |
| 2.4.1 原子力显微镜检测表征 | 第30页 |
| 2.4.2 电化学检测表征 | 第30-31页 |
| 2.5 Trx全长以及CDNA克隆 | 第31-39页 |
| 2.5.1 特异性引物设计 | 第31页 |
| 2.5.2 肥城桃果实总RNA提取 | 第31-32页 |
| 2.5.3 c DNA反转录 | 第32页 |
| 2.5.4 引物最佳淬火温度测定 | 第32-33页 |
| 2.5.5 回收目的c DNA片段 | 第33-34页 |
| 2.5.6 克隆载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.5.7 提质粒双酶切验证 | 第35页 |
| 2.5.8 构建表达载体 | 第35-37页 |
| 2.5.9 诱导Trx表达 | 第37页 |
| 2.5.10 SDS-PAGE电泳分析 | 第37-38页 |
| 2.5.11 确定目标蛋白在上清还是包涵体 | 第38页 |
| 2.5.12 Trx蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| 2.6 Trx基因表达量的检测 | 第39-40页 |
| 2.7 生物素转换法检测巯基亚硝基化蛋白 | 第40-41页 |
| 2.8 NO对冷藏桃果实抗氧化系统的调控作用 | 第41-44页 |
| 2.8.1 MDA含量检测 | 第41页 |
| 2.8.2 DPPH?自由基清除活性的检测 | 第41页 |
| 2.8.3 抗坏血酸-谷胱甘肽循环系统相关酶活性的检测 | 第41-42页 |
| 2.8.4 总抗坏血酸、还原型抗坏血酸和脱氢抗坏血酸测定 | 第42-43页 |
| 2.8.5 总谷胱甘肽、还原型的和氧化型谷胱甘肽的测定 | 第43-44页 |
| 3. 结果与分析 | 第44-60页 |
| 3.1 SPR传感器的表征及分析应用 | 第44-48页 |
| 3.1.1 原子力显微镜表征 | 第44-45页 |
| 3.1.2 电化学表征 | 第45页 |
| 3.1.3 SPR检测不同浓度的BSA | 第45-46页 |
| 3.1.4 BSA亚硝基化前后SPR信号变化 | 第46-47页 |
| 3.1.5 桃果实线粒体蛋白S-亚硝基化研究 | 第47-48页 |
| 3.2 Trx全长以及CDNA克隆 | 第48-52页 |
| 3.2.1 初始引物温度梯度PCR结果 | 第48-49页 |
| 3.2.2 克隆载体菌液PCR结果 | 第49页 |
| 3.2.3 质粒双酶切结果 | 第49-50页 |
| 3.2.4 重组质粒双酶切后电泳结果图 | 第50页 |
| 3.2.5 Trx蛋白表达 | 第50-52页 |
| 3.3 荧光定量PCR | 第52-53页 |
| 3.3.1 RNA完整性验证 | 第52页 |
| 3.3.2 荧光定量PCR结果 | 第52-53页 |
| 3.4 NO与Trx的相互作用 | 第53-54页 |
| 3.4.1 NO与Trx蛋白的紫外分光光谱 | 第53-54页 |
| 3.4.2 NO与Trx蛋白的荧光光谱 | 第54页 |
| 3.5 生物素转换法检测巯基亚硝基化蛋白 | 第54-55页 |
| 3.6 NO对冷藏桃果实抗氧化系统的调控作用 | 第55-60页 |
| 3.6.1 MDA含量检测 | 第55-56页 |
| 3.6.2 APX活性及DPPH?自由基清除活性的检测 | 第56页 |
| 3.6.3 抗坏血酸-谷胱甘肽循环系统相关酶活性的检测 | 第56-58页 |
| 3.6.4 可溶性抗坏血酸和谷胱甘肽含量的变化 | 第58-60页 |
| 4. 讨论 | 第60-63页 |
| 4.1 SPR检测蛋白巯基亚硝基化 | 第60页 |
| 4.2 Trx表达及NO对Trx基因表达的影响 | 第60-61页 |
| 4.3 NO对桃果实脂质过氧化和抗氧化系统的影响 | 第61-63页 |
| 5. 结论 | 第63-64页 |
| 创新之处 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 硕士期间论文情况 | 第75页 |
