符号说明 | 第4-9页 |
中文摘要 | 第9-11页 |
Abstract | 第11-12页 |
1 引言 | 第13-22页 |
1.1 腺嘌呤核苷酸转位酶 | 第13-17页 |
1.1.1 线粒体与细胞凋亡 | 第13-14页 |
1.1.2 线粒体通透性转换孔道和腺嘌呤核苷酸转位酶的结构与功能 | 第14-16页 |
1.1.3 ANT的研究前景 | 第16-17页 |
1.2 一氧化氮与植物线粒体的生理代谢 | 第17-21页 |
1.2.1 线粒体的抗氧化系统 | 第17-18页 |
1.2.2 丙二醛 | 第18-19页 |
1.2.3 N-乙酰-L-半胱氨酸 | 第19页 |
1.2.4 一氧化氮 | 第19-21页 |
1.3 研究内容及意义 | 第21-22页 |
2 材料与方法 | 第22-44页 |
2.1 实验材料 | 第22-23页 |
2.1.1 仪器与试剂 | 第22-23页 |
2.1.2 实验材料 | 第23页 |
2.1.3 质粒与菌种 | 第23页 |
2.2 实验方法 | 第23-44页 |
2.2.1 线粒体腺嘌呤转位酶(ANT)全长cDNA的克隆 | 第23-31页 |
2.2.2 体外表达ANT蛋白 | 第31-36页 |
2.2.3 ANT与PiC蛋白质的相互作用 | 第36-38页 |
2.2.4 NO与ANT蛋白的作用 | 第38页 |
2.2.5 NO对ANT基因表达量的影响 | 第38-39页 |
2.2.6 NO处理对桃果实线粒体功能的影响 | 第39-44页 |
3 结果与分析 | 第44-67页 |
3.1 线粒体腺嘌呤转位酶(ANT)全长cDNA的克隆 | 第44-46页 |
3.1.1 提取桃果实总RNA | 第44页 |
3.1.2 兼并引物的PCR | 第44页 |
3.1.3 RACE | 第44-46页 |
3.2 ANT全序列分析 | 第46-51页 |
3.2.1 ANT序列的开放阅读框分析 | 第46-48页 |
3.2.2 ANT基因序列比对分析 | 第48页 |
3.2.3 ANT蛋白结构的模拟预测 | 第48-51页 |
3.3 ANT蛋白体外表达、纯化与复性 | 第51-55页 |
3.3.1 ANT表达载体的构建 | 第51-53页 |
3.3.2 ANT蛋白的表达、纯化与复性 | 第53-55页 |
3.4 ANT与PiC蛋白质的相互作用 | 第55-56页 |
3.4.1 构建酵母载体 | 第55页 |
3.4.2 ANT与PiC蛋白质相互检验 | 第55-56页 |
3.5 NO与ANT的相互作用 | 第56-59页 |
3.5.1 NO与ANT相互作用的荧光光谱 | 第56-57页 |
3.5.2 NO对ANT蛋白溶液的荧光猝灭作用 | 第57-59页 |
3.6 NO对ANT基因表达量的影响 | 第59-60页 |
3.7 NO处理对桃果实线粒体功能的影响 | 第60-67页 |
3.7.1 线粒体中ROS含量的测定 | 第60-61页 |
3.7.2 线粒体中SOD活性的检测 | 第61-62页 |
3.7.3 线粒体中POD活性的检测 | 第62-63页 |
3.7.4 线粒体中CAT活性的检测 | 第63页 |
3.7.5 线粒体内MDA含量的检测 | 第63-64页 |
3.7.6 线粒体膜电势的测定 | 第64-65页 |
3.7.7 线粒体呼吸的测定 | 第65页 |
3.7.8 NAC对线粒体各生理指标的影响 | 第65-67页 |
4 讨论 | 第67-71页 |
4.1 ANT基因序列的克隆与蛋白序列的分析 | 第67页 |
4.2 ANT蛋白的表达、纯化与复性 | 第67-68页 |
4.3 NO与ANT蛋白的相互作用 | 第68页 |
4.4 NO对ANT表达量的影响 | 第68-69页 |
4.5 ANT蛋白与PiC蛋白的相互作用 | 第69页 |
4.6 NO对桃果实线粒体功能的影响 | 第69-71页 |
5 结论 | 第71-72页 |
创新之处 | 第72-73页 |
参考文献 | 第73-86页 |
致谢 | 第86-87页 |
硕士期间论文发表情况 | 第87页 |