| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩写符号 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| 1 多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶的研究概况 | 第14-16页 |
| 1.1 多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶简介 | 第14-15页 |
| 1.2 HsppGalNAc-T2的相关信息 | 第15-16页 |
| 1.3 HsppGalNAc-T8的相关信息 | 第16页 |
| 2 黏蛋白的研究概况 | 第16-20页 |
| 2.1 黏蛋白简介 | 第16-18页 |
| 2.2 黏蛋白家族的分类 | 第18页 |
| 2.3 黏蛋白结构与功能 | 第18-19页 |
| 2.4 黏蛋白MUC5AC | 第19-20页 |
| 3 原核表达载体的类型及其研究概况 | 第20-22页 |
| 4 本研究的目的意义与主要内容 | 第22-24页 |
| 4.1 本研究的目的与意义 | 第22页 |
| 4.2 主要研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 Homo sapiens源ppGalNAc-T2/T8的亚克隆、表达及活性检测 | 第24-52页 |
| 1 材料 | 第24-26页 |
| 1.1 菌种与质粒 | 第24页 |
| 1.2 培养基与抗生素的配制 | 第24-25页 |
| 1.3 主要试剂 | 第25页 |
| 1.4 主要实验仪器设备 | 第25-26页 |
| 2 实验方法 | 第26-39页 |
| 2.1 目的基因的常规分子克隆 | 第26-34页 |
| 2.1.1 菌株毕赤酵母重组质粒pPICZαB-HSGT2/GT8的模板基因提取 | 第26-27页 |
| 2.1.2 PCR引物的设计 | 第27页 |
| 2.1.3 PCR扩增反应体系 | 第27-28页 |
| 2.1.4 PCR扩增产物的回收、纯化 | 第28-29页 |
| 2.1.5 DNA纯化产物与克隆载体pMD18-T的连接 | 第29-30页 |
| 2.1.6 连接产物的转化 | 第30-31页 |
| 2.1.7 PCR法筛选重组目的基因 | 第31页 |
| 2.1.8 目的重组质粒的提取 | 第31-32页 |
| 2.1.9 双酶切反应及其产物的回收纯化 | 第32页 |
| 2.1.10 目的基因与表达载体pET30a的连接 | 第32-33页 |
| 2.1.11 转化 | 第33页 |
| 2.1.12 PCR法鉴定插入片段 | 第33-34页 |
| 2.1.13 目的基因的测序与冻藏 | 第34页 |
| 2.2 重组ppGalNAc-T2/T8的诱导表达 | 第34-35页 |
| 2.3 可溶性重组ppGalNAc-T2/T8酶的纯化 | 第35-36页 |
| 2.4 包涵体重组ppGalNAc-T2/T8酶的复性纯化 | 第36页 |
| 2.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定重组蛋白 | 第36-38页 |
| 2.5.1 试剂准备 | 第36-37页 |
| 2.5.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第37-38页 |
| 2.6 重组蛋白的活性测定 | 第38-39页 |
| 2.6.1 液相-质谱联用仪法测定重组ppGalNAc-T2/T8活性 | 第38-39页 |
| 2.6.2 MALDI-ToF-MS法测定重组ppGalNAc-T2/T8活性 | 第39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-49页 |
| 3.1 PCR产物凝胶电泳结果 | 第39-40页 |
| 3.2 重组ppGalNAc-T2/T8基因测序结果 | 第40-43页 |
| 3.3 重组ppGalNAc-T2/T8的纯化结果 | 第43页 |
| 3.4 重组ppGalNAc-T2/T8活性测定结果 | 第43-49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 5 本章小结 | 第50-52页 |
| 第三章 原核表达载体的改造及其应用 | 第52-64页 |
| 1 材料 | 第52-54页 |
| 1.1 试剂与载体 | 第52-53页 |
| 1.2 实验设备 | 第53-54页 |
| 2 实验方法 | 第54-58页 |
| 2.1 原核表达载体的改造 | 第54-56页 |
| 2.2 绿色荧光蛋白在改造后载体中的表达 | 第56-57页 |
| 2.3 HsppGalNAc-T2基因与CDF-CRS载体构建重组质粒 | 第57页 |
| 2.4 UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因与pACYC-CRS载体构建重组质粒 | 第57-58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-61页 |
| 3.1 绿色荧光蛋白在改造后载体中的表达结果 | 第58-59页 |
| 3.2 UDP-葡萄糖-4-差向异构酶酶活测定结果 | 第59-60页 |
| 3.3 表达重组质粒的构建结果 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-62页 |
| 5 本章小结 | 第62-64页 |
| 第四章 Tn抗原的生物合成 | 第64-72页 |
| 1 材料与实验设备 | 第64-65页 |
| 1.1 主要试剂 | 第64页 |
| 1.2 实验设备 | 第64-65页 |
| 2 实验方法 | 第65-67页 |
| 2.1 与Tn抗原生物合成相关酶的表达 | 第65页 |
| 2.2 釜多酶法合成Tn抗原 | 第65-67页 |
| 3 结果与分析 | 第67-69页 |
| 4 讨论 | 第69-70页 |
| 5 小结 | 第70-72页 |
| 全文结论 | 第72-74页 |
| 展望 | 第74-76页 |
| 论文创新点 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 附录 | 第84-92页 |
| 1 试剂与设备 | 第84页 |
| 2 实验方法 | 第84-88页 |
| 3 实验结果 | 第88-91页 |
| 参考文献 | 第91-92页 |
| 攻读硕士学位论文发表情况 | 第92-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
