| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第18-28页 |
| 1.1 背景 | 第18页 |
| 1.2 酿酒酵母的蛋白分泌机制 | 第18-24页 |
| 1.2.1 内质网与蛋白质作用机制 | 第18-20页 |
| 1.2.2 高尔基体与蛋白质作用机制 | 第20页 |
| 1.2.3 高尔基后分选机制和胞外分泌 | 第20-21页 |
| 1.2.4 未折叠分泌蛋白的应答-转录机制 | 第21-24页 |
| 1.3 提高酿酒酵母分泌能力的研究现状 | 第24-26页 |
| 1.3.1 信号肽的改造 | 第24-25页 |
| 1.3.2 蛋白质折叠与糖基化的改造 | 第25页 |
| 1.3.3 蛋白质运输通道的改造和蛋白酶的减少 | 第25-26页 |
| 1.4 分泌机制的研究手段 | 第26页 |
| 1.5 本文的研究意义与内容 | 第26-28页 |
| 第二章 漆酶在酿酒酵母中的表达 | 第28-54页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第28-30页 |
| 2.2.1 菌株、载体与引物 | 第28页 |
| 2.2.2 试剂和试剂盒 | 第28页 |
| 2.2.3 溶液配制及培养基 | 第28-29页 |
| 2.2.4 仪器及设备 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-42页 |
| 2.3.1 质粒构建 | 第30-37页 |
| 2.3.2 重组质粒的转化 | 第37-39页 |
| 2.3.3 重组酵母的发酵及蛋白的提取纯化 | 第39-41页 |
| 2.3.4 漆酶酶活测定方法 | 第41-42页 |
| 2.4 实验结果 | 第42-51页 |
| 2.4.1 构建重组质粒yTAMC | 第42-44页 |
| 2.4.2 构建重组质粒yTLC和yTALC | 第44-45页 |
| 2.4.3 构建重组质粒pGLC和pGALC | 第45-46页 |
| 2.4.4 酿酒酵母的转化 | 第46页 |
| 2.4.5 不同启动子对产胞内酶的菌株产酶情况的影响 | 第46-48页 |
| 2.4.6 不同启动子对产胞外酶的菌株产酶情况的影响 | 第48-51页 |
| 2.5 本章小结 | 第51-54页 |
| 第三章 信号肽对蛋白胞外分泌的影响 | 第54-62页 |
| 3.1 引言 | 第54页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第54-55页 |
| 3.2.1 菌株、载体与引物 | 第54页 |
| 3.2.2 试剂和试剂盒 | 第54-55页 |
| 3.2.3 溶液配制及培养基 | 第55页 |
| 3.2.4 仪器及设备 | 第55页 |
| 3.3 实验方法 | 第55-56页 |
| 3.3.1 质粒构建 | 第55-56页 |
| 3.3.2 重组质粒的转化及菌株发酵 | 第56页 |
| 3.4 实验结果 | 第56-60页 |
| 3.4.1 构建重组质粒 | 第56-58页 |
| 3.4.2 酿酒酵母的转化 | 第58页 |
| 3.4.3 不同信号肽介导产胞外酶菌株的产酶情况 | 第58-60页 |
| 3.5 本章小结 | 第60-62页 |
| 第四章 辅助蛋白对蛋白胞外分泌的影响 | 第62-74页 |
| 4.1 引言 | 第62页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第62-64页 |
| 4.2.1 菌株、载体和引物 | 第62-63页 |
| 4.2.2 试剂和试剂盒 | 第63-64页 |
| 4.2.3 溶液配制及培养基 | 第64页 |
| 4.2.4 仪器及设备 | 第64页 |
| 4.3 实验方法 | 第64-65页 |
| 4.3.1 质粒构建 | 第64-65页 |
| 4.3.2 重组质粒的转化和菌株发酵 | 第65页 |
| 4.4 实验结果 | 第65-72页 |
| 4.4.1 构建重组质粒yPS2P、yPS1P、yPRP | 第65-67页 |
| 4.4.2 构建重组质粒yPPP、 yPKP、 yPBP、 yPHP、yPCP | 第67-68页 |
| 4.4.3 酿酒酵母的转化 | 第68-69页 |
| 4.4.4 过表达辅助蛋白菌株的生长和产酶情况 | 第69-72页 |
| 4.5 本章小结 | 第72-74页 |
| 第五章 辅助蛋白的协同作用对蛋白胞外分泌的影响及其普遍适用性研究 | 第74-90页 |
| 5.1 引言 | 第74页 |
| 5.2 材料与仪器 | 第74-75页 |
| 5.2.1 菌株、载体与引物 | 第74页 |
| 5.2.2 试剂和试剂盒 | 第74页 |
| 5.2.3 溶液配制及培养基 | 第74-75页 |
| 5.2.4 仪器及设备 | 第75页 |
| 5.3 实验方法 | 第75-77页 |
| 5.3.1 质粒构建 | 第75-76页 |
| 5.3.2 重组质粒的转化和菌株的发酵 | 第76-77页 |
| 5.3.3 SSO_2和RPP0共表达对异源蛋白的普遍适用性研究 | 第77页 |
| 5.4 实验结果 | 第77-87页 |
| 5.4.1 构建重组质粒yPS2、yRB、yRS2、yRP、yRS1、yBS2、yBP | 第77-79页 |
| 5.4.2 构建重组质粒pGAAC、pGAEC | 第79-80页 |
| 5.4.3 酿酒酵母的转化 | 第80-81页 |
| 5.4.4 辅助蛋白共表达菌株的生长和产酶情况 | 第81-86页 |
| 5.4.5 RPP0和SSO2共表达对其他蛋白胞外分泌效果研究 | 第86-87页 |
| 5.5 本章小结 | 第87-90页 |
| 第六章 结论与展望 | 第90-92页 |
| 6.1 结论 | 第90页 |
| 6.2 展望 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-102页 |
| 附录一 试剂与试剂盒 | 第102-104页 |
| 附录二 仪器与设备 | 第104-106页 |
| 致谢 | 第106-108页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第108-110页 |
| 作者和导师简介 | 第110-112页 |
| 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第112-113页 |
