| 致谢 | 第1-14页 |
| 中文摘要 | 第14-16页 |
| Abstract | 第16-19页 |
| 简写对照表 | 第19-21页 |
| 第一章 文献综述 | 第21-44页 |
| 1 前言 | 第21页 |
| 2 果蔬采后病害防治的常用方法 | 第21-24页 |
| 3 生物防治的作用机理 | 第24-28页 |
| 4 提高生防拮抗菌效力的方法 | 第28-30页 |
| 5 抗菌肽研究进展及其在生物防治中的应用前景 | 第30-36页 |
| 6 酵母表达系统 | 第36-43页 |
| 7 本论文选题的意义和总体研究设想 | 第43-44页 |
| 第二章 Psd1、cecropin A基因的克隆及表达载体的构建 | 第44-63页 |
| 1 前言 | 第44页 |
| 2 材料与方法 | 第44-57页 |
| ·材料 | 第44-48页 |
| ·实验方法 | 第48-57页 |
| 3 实验结果 | 第57-61页 |
| ·重组载体T-PSD,T-CEC的PCR鉴定 | 第57-58页 |
| ·两种抗菌肽基因酵母表达载体的构建 | 第58页 |
| ·重组载体向酵母的转化及高抗性转化子的筛选 | 第58-59页 |
| ·高抗转化子的PCR鉴定 | 第59页 |
| ·重组酵母GS115/CEC、GS115/PSD的诱导表达 | 第59-60页 |
| ·蛋白含量测定 | 第60页 |
| ·重组子稳定性分析 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 第三章 重组酵母GS115/CEC、GS115/PSD的抑菌效力分析 | 第63-82页 |
| 第一节 重组酵母对几种常见病原菌的抑菌效力分析 | 第63-73页 |
| 1 前言 | 第63页 |
| 2 材料与方法 | 第63-66页 |
| ·主要仪器 | 第63-64页 |
| ·试剂及培养基 | 第64页 |
| ·果实选择与预处理 | 第64页 |
| ·病原菌 | 第64-65页 |
| ·病原菌的培养与孢子悬浮液制备 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-66页 |
| 3 实验结果 | 第66-71页 |
| ·PDA平板法研究重组酵母对几种病原菌的体外抑菌试验 | 第66-67页 |
| ·两种重组酵母细胞悬浮液对樱桃番茄采后病原菌链格孢抑制效果 | 第67-68页 |
| ·两种重组酵母细胞悬浮液对柑橘采后酸腐病抑制效果 | 第68-69页 |
| ·两种重组酵母对苹果采后病原菌扩展青霉和灰葡萄孢抑制效果 | 第69-70页 |
| ·两种重组酵母对梨采后病原菌扩展青霉和灰葡萄孢抑制效果 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-73页 |
| 第二节 重组酵母与外源物质结合使用提高对果实采后真菌病害抑制效果研究 | 第73-82页 |
| 1 前言 | 第73-74页 |
| 2 材料和方法 | 第74-76页 |
| ·主要仪器 | 第74页 |
| ·试剂及培养基 | 第74页 |
| ·果实、酵母及病原菌 | 第74-75页 |
| ·不同外源物质对GS115/CEC生长的影响试验 | 第75页 |
| ·不同外源物质对GS115/CEC在果实伤口生长动态的影响 | 第75页 |
| ·不同外源物质对重组酵母GS115/CEC抑制苹果采后扩展青霉效果的影响 | 第75-76页 |
| ·数据处理与分析 | 第76页 |
| 3 结果 | 第76-79页 |
| ·不同外源物质对GS115/CEC在固体培养基上生长的影响试验 | 第76-77页 |
| ·外源物质对重组酵母在果实伤口生长动态的影响 | 第77-78页 |
| ·不同外源物质对重组酵母GS115/CEC对果实采后真菌病害抑制效果的影响(in vivo) | 第78-79页 |
| 4 讨论 | 第79-82页 |
| 第四章 重组酵母发酵条件优化 | 第82-93页 |
| 1 前言 | 第82页 |
| 2 材料和方法 | 第82-83页 |
| ·菌种 | 第82页 |
| ·试剂及培养基 | 第82页 |
| ·仪器 | 第82-83页 |
| ·酵母细胞密度测定 | 第83页 |
| ·蛋白表达量的测定 | 第83页 |
| 3 结果与分析 | 第83-92页 |
| ·碳源的影响 | 第83-84页 |
| ·氮源对菌体生长的影响 | 第84-87页 |
| ·培养基的pH对菌体生物量和蛋白表达量的影响 | 第87-88页 |
| ·甲醇对菌体生物量和蛋白产量的影响 | 第88-89页 |
| ·正交试验优化发酵条件 | 第89-90页 |
| ·正交实验的验证 | 第90-92页 |
| 4 讨论 | 第92-93页 |
| 第五章 重组酵母对病原真菌的抑制机理初探 | 第93-145页 |
| 第一节 重组酵母对病原真菌抑制的体内、体外实验 | 第93-103页 |
| 1 前言 | 第93页 |
| 2 材料和方法 | 第93-95页 |
| ·主要仪器 | 第93页 |
| ·病原菌培养和孢子悬浮液的制备 | 第93页 |
| ·重组酵母悬浮液的制备 | 第93页 |
| ·体外(In vitro)及体内试验(in vivo) | 第93-95页 |
| ·数据处理与分析 | 第95页 |
| 3 结果 | 第95-101页 |
| ·重组酵母对病原菌孢子出芽情况的影响(PDB) | 第95-97页 |
| ·重组酵母与病原菌接种时间间隔对苹果储藏期青霉病害的抑制效果 | 第97-98页 |
| ·重组酵母不同甲醇诱导时间对苹果储藏期青霉病害的抑制效果 | 第98-99页 |
| ·重组酵母不同浓度细胞悬浮液对苹果储藏期青霉病的抑制效果 | 第99-100页 |
| ·重组酵母生长曲线及苹果伤口处的生长动态测定 | 第100-101页 |
| 4 讨论 | 第101-103页 |
| 第二节 细胞、分子水平抑菌机理初探 | 第103-119页 |
| 1 前言 | 第103页 |
| 2 材料和方法 | 第103-110页 |
| ·主要仪器 | 第103页 |
| ·病原菌培养和孢子悬浮液的制备 | 第103页 |
| ·试剂、培养基及重组酵母悬浮液的制备 | 第103-104页 |
| ·用MTT法测定抗菌肽cecropinA对几种病原菌的抑菌曲线 | 第104页 |
| ·重组酵母对链格孢孢子及菌丝生长的影响 | 第104-105页 |
| ·重组酵母GS115/CEC、GS115/PSD对病原菌DNA及蛋白合成的影响 | 第105-106页 |
| ·重组酵母的表达产物与真菌DNA/RNA相互作用研究 | 第106-107页 |
| ·重组酵母GS115/CEC处理果实后对相关抗性基因表达水平的影响 | 第107-110页 |
| ·数据处理与分析 | 第110页 |
| 3 实验结果 | 第110-116页 |
| ·MTT法测定抗菌肽cecropinA对几种病原菌的抑菌曲线 | 第110-111页 |
| ·重组酵母对链格孢孢子及菌丝生长的影响 | 第111-113页 |
| ·重组酵母GS115/CEC、GS115/PSD对病原菌DNA及蛋白合成的影响 | 第113页 |
| ·重组酵母GS115/CEC表达产物与真菌DNA/RNA相互作用研究 | 第113-115页 |
| ·重组酵母GS115/CEC对果实相关抗性基因表达水平的影响 | 第115-116页 |
| 4 讨论 | 第116-119页 |
| 第三节 PR5基因的生防功能验证 | 第119-145页 |
| 1 前言 | 第119页 |
| 2 材料与方法 | 第119-128页 |
| ·主要仪器 | 第119页 |
| ·酵母菌及其培养基 | 第119-120页 |
| ·植物材料、菌株及质粒 | 第120页 |
| ·酶、各种生化试剂及培养基 | 第120-121页 |
| ·采后抗性有关基因LePR-5基因的表达特性研究 | 第121-122页 |
| ·LePR-5基因干扰表达载体的构建 | 第122-124页 |
| ·RNAi表达载体pBIA-LePR-5-RNAi转化农杆菌 | 第124页 |
| ·干扰表达载体pBIA-LePR-5-RNAi在番茄中的表达研究 | 第124-127页 |
| ·转基因番茄性状观察和抗病分析 | 第127-128页 |
| 3 实验结果 | 第128-140页 |
| ·LePR-5基因的表达特性分析 | 第128-135页 |
| ·RNA干扰表达载体的构建 | 第135-137页 |
| ·干扰表达载体pBIA-LePR-5-RNAi在番茄中的表达研究 | 第137-139页 |
| ·F1代转基因番茄性状观察和抗病分析 | 第139-140页 |
| 4 讨论 | 第140-145页 |
| 第六章 重组酵母的安全性初步分析及对果实品质的影响 | 第145-152页 |
| 第一节 重组酵母对小白鼠的经口毒性实验 | 第145-148页 |
| 1 前言 | 第145页 |
| 2 实验材料和方法 | 第145-146页 |
| ·主要仪器 | 第145-146页 |
| ·试剂及培养基 | 第146页 |
| ·菌体培养和制备 | 第146页 |
| ·实验动物 | 第146页 |
| ·检测方法 | 第146页 |
| 3 结果 | 第146-147页 |
| 4 讨论 | 第147-148页 |
| 第二节 重组酵母对果实品质的影响 | 第148-152页 |
| 1 前言 | 第148页 |
| 2 实验材料和方法 | 第148-150页 |
| ·主要仪器 | 第148页 |
| ·试剂及培养基 | 第148-149页 |
| ·果实选择与预处理 | 第149页 |
| ·品质测定 | 第149页 |
| ·数据处理与分析 | 第149-150页 |
| 3 结果 | 第150页 |
| 4 讨论 | 第150-152页 |
| 第七章 本论文的主要研究成果及后续设想 | 第152-155页 |
| 1 本论文的主要研究成果 | 第152-153页 |
| 2 创新点 | 第153页 |
| 3 后续研究展望 | 第153-155页 |
| 参考文献 | 第155-172页 |
| 附录 | 第172-173页 |
| 作者简介 | 第173页 |
| 攻读博士期间已发表的主要论文 | 第173页 |
