| 摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-24页 |
| 1.1 立题背景 | 第14页 |
| 1.2 文献综述 | 第14-22页 |
| 1.2.1 保加利亚乳杆菌 | 第14-16页 |
| 1.2.2 乳酸菌应激反应 | 第16-17页 |
| 1.2.3 碳分解代谢阻遏蛋白 | 第17-19页 |
| 1.2.4 基因敲除概述 | 第19-22页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 1.4 技术路线 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-45页 |
| 2.1 试验材料 | 第24-29页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第24页 |
| 2.1.2 质粒 | 第24-26页 |
| 2.1.3 工具酶和试剂盒 | 第26页 |
| 2.1.4 培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.5 常规试剂 | 第27页 |
| 2.1.6 常用贮备液的配置 | 第27-29页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-44页 |
| 2.3.1 基因敲除载体和打靶片段的构建 | 第29-38页 |
| 2.3.2 基因敲除突变株的筛选和鉴定 | 第38-40页 |
| 2.3.3 生长曲线的建立 | 第40页 |
| 2.3.4 Ccp A缺失对保加利亚乳杆菌糖代谢的影响 | 第40-41页 |
| 2.3.5 Ccp A缺失对保加利亚乳杆菌糖酵解关键酶活性的影响 | 第41-44页 |
| 2.3.6 Ccp A缺失对保加利亚乳杆菌抗胁迫能力的影响 | 第44页 |
| 2.4 统计学分析 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-63页 |
| 3.1 重组质粒p Back Zero-Ccp A的构建和鉴定 | 第45-47页 |
| 3.1.1 目的菌基因组DNA的提取 | 第45页 |
| 3.1.2 Ccp A基因敲除 | 第45-46页 |
| 3.1.3 阳性重组克隆p Back Zero-Ccp A的筛选 | 第46页 |
| 3.1.4 阳性重组克隆p Back Zero-Ccp A的鉴定 | 第46页 |
| 3.1.5 p Back Zero-Ccp A的提取及酶切验证 | 第46-47页 |
| 3.1.6 阳性克隆的序列测定 | 第47页 |
| 3.2 重组质粒p Back Zero-Tet的构建和鉴定 | 第47-49页 |
| 3.2.1 Tet基因的扩增 | 第47-48页 |
| 3.2.2 Tet基因的纯化 | 第48页 |
| 3.2.3 阳性重组克隆p Back Zero-Tet的筛选 | 第48页 |
| 3.2.4 菌落PCR的鉴定结果 | 第48-49页 |
| 3.2.5 p Back Zero-Tet的提取及酶切验证 | 第49页 |
| 3.2.6 阳性克隆的序列测定 | 第49页 |
| 3.3 重组质粒p CT的构建和鉴定 | 第49-52页 |
| 3.3.1 目的片段的获取 | 第49-50页 |
| 3.3.2 p CT基因打靶载体的鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3.3 基因打靶片段的构建 | 第51-52页 |
| 3.4 基因缺失突变株的筛选和鉴定 | 第52-53页 |
| 3.4.1 基因缺失突变株的筛选 | 第52页 |
| 3.4.2 基因缺失突变株的鉴定 | 第52-53页 |
| 3.5 保加利亚乳杆菌生长曲线的建立 | 第53-54页 |
| 3.6 Ccp A缺失对保加利亚乳杆菌糖代谢途径的影响 | 第54-58页 |
| 3.6.1 Ccp A缺失对葡萄糖利用率及消耗率的影响 | 第54-55页 |
| 3.6.2 Ccp A缺失对乳酸及乙酸代谢的影响 | 第55-58页 |
| 3.7 Ccp A缺失对保加利亚乳杆菌糖酵解关键酶活性的影响 | 第58-60页 |
| 3.7.1 蛋白质定量 | 第58-59页 |
| 3.7.2 乳酸脱氢酶活性 | 第59页 |
| 3.7.3 磷酸果糖激酶活性 | 第59-60页 |
| 3.7.4 丙酮酸激酶活性 | 第60页 |
| 3.8 Ccp A缺失对保加利亚乳杆菌抗胁迫能力的影响 | 第60-63页 |
| 3.8.1 热 | 第60-61页 |
| 3.8.2 冷 | 第61-62页 |
| 3.8.3 氧化 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-69页 |
| 4.1 Ccp A突变菌的构建 | 第63-65页 |
| 4.1.1 载体选择 | 第63页 |
| 4.1.2 同源臂长度 | 第63页 |
| 4.1.3 抗性筛选 | 第63-64页 |
| 4.1.4 酶切位点选择 | 第64页 |
| 4.1.5 电转化 | 第64-65页 |
| 4.2 Ccp A缺失对保加利亚乳杆菌生长代谢的影响 | 第65-66页 |
| 4.3 Ccp A缺失对保加利亚乳杆菌糖酵解关键酶活性的影响 | 第66-67页 |
| 4.4 Ccp A缺失对保加利亚乳杆菌抗胁迫能力的影响 | 第67页 |
| 4.5 Ccp A与细胞呼吸 | 第67-69页 |
| 5 结论 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 附录 | 第80-84页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第84页 |
