| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-15页 |
| 1.1 研究背景 | 第8页 |
| 1.2 乳酸研究现状 | 第8-11页 |
| 1.2.1 乳酸概述 | 第8页 |
| 1.2.2 乳酸作用 | 第8-9页 |
| 1.2.3 乳酸生产方法 | 第9-11页 |
| 1.3 代谢途径关键酶确定研究现状 | 第11-13页 |
| 1.4 体外多酶催化的优势及应用 | 第13-14页 |
| 1.5 本文的研究内容及技术路线 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-19页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 主要化学药品 | 第15-17页 |
| 2.1.3 实验仪器和设备 | 第17-18页 |
| 2.1.4 培养基及抗生素 | 第18页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-30页 |
| 2.2.1 质粒构建 | 第19-22页 |
| 2.2.2 乳酸合成途径各蛋白的获得 | 第22-24页 |
| 2.2.3 标准曲线的制备 | 第24-25页 |
| 2.2.4 途径蛋白活性测定 | 第25-27页 |
| 2.2.5 乳酸合成途径蛋白动力学参数的测定 | 第27-28页 |
| 2.2.6 粗酶液中乳酸合成途径各蛋白绝对浓度的测定 | 第28-29页 |
| 2.2.7 代谢物浓度测定 | 第29页 |
| 2.2.8 通量控制系数计算方法 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-58页 |
| 3.1 乳酸合成途径各蛋白的表达、纯化及酶学性质分析 | 第30-31页 |
| 3.1.1 PCR扩增目的基因的电泳分析 | 第30页 |
| 3.1.2 各纯酶的SDS-PAGE图谱 | 第30-31页 |
| 3.1.3 乳酸合成途径各蛋白浓度测定 | 第31页 |
| 3.2 乳酸合成途径各蛋白活性测定 | 第31-36页 |
| 3.2.1 PfkA、FbaA、GapA蛋白活性测定 | 第31-36页 |
| 3.2.3 其他蛋白活性测定 | 第36页 |
| 3.3 乳酸合成途径中各蛋白动力学参数的测定 | 第36-46页 |
| 3.3.1 乳酸合成途径中各蛋白比酶活的测定 | 第36-40页 |
| 3.3.2 乳酸合成途径中各蛋白K_m值的测定 | 第40-46页 |
| 3.4 粗酶液中乳酸合成途径各蛋白绝对浓度的测定 | 第46-53页 |
| 3.4.1 Glk | 第46-47页 |
| 3.4.2 Pgi | 第47-48页 |
| 3.4.3 PfkA | 第48-49页 |
| 3.4.4 FbaA | 第49-50页 |
| 3.4.5 TpiA | 第50页 |
| 3.4.6 GapA | 第50-51页 |
| 3.4.7 Pgk | 第51-52页 |
| 3.4.8 PykA | 第52-53页 |
| 3.4.9 Ldh | 第53页 |
| 3.5 乳酸合成途径中各蛋白的通量控制系数计算 | 第53-58页 |
| 3.5.1 乳酸测定 | 第54-55页 |
| 3.5.2 乳酸生成速率的测定 | 第55-57页 |
| 3.5.3 各蛋白通量控制系数的确定 | 第57-58页 |
| 4 结论 | 第58-59页 |
| 5 展望 | 第59-60页 |
| 6 参考文献 | 第60-67页 |
| 7 硕士学位期间论文发表情况 | 第67-68页 |
| 8 致谢 | 第68页 |
