| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 主要符号表 | 第17-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-40页 |
| 1.1 常见食源性致病菌 | 第19-27页 |
| 1.1.1 单核细胞增生李斯特菌 | 第19-20页 |
| 1.1.2 副溶血性弧菌 | 第20-22页 |
| 1.1.3 沙门氏菌 | 第22-23页 |
| 1.1.4 大肠杆菌 | 第23-24页 |
| 1.1.5 阪崎肠杆菌 | 第24-25页 |
| 1.1.6 其它食源性致病菌 | 第25-27页 |
| 1.2 我国食源性致病菌污染现状 | 第27-29页 |
| 1.3 食源性致病菌检测方法研究进展 | 第29-36页 |
| 1.3.1 传统检测方法 | 第29页 |
| 1.3.2 基于免疫学的检测方法 | 第29-33页 |
| 1.3.2.1 酶联免疫吸附检测方法 | 第29-30页 |
| 1.3.2.2 免疫荧光技术 | 第30页 |
| 1.3.2.3 免疫层析技术 | 第30-32页 |
| 1.3.2.4 免疫磁珠分离技术 | 第32-33页 |
| 1.3.3 生物传感技术 | 第33-34页 |
| 1.3.4 基于核酸的检测方法 | 第34-36页 |
| 1.4 荧光微球及其在食源性致病菌检测中的应用 | 第36-38页 |
| 1.4.1 荧光微球的制备方法 | 第37-38页 |
| 1.4.2 荧光微球在食源性致病菌检测中的应用 | 第38页 |
| 1.5 本研究的目的意义和主要内容 | 第38-40页 |
| 第二章 几种食源性致病菌多克隆抗体的制备及配对筛选 | 第40-51页 |
| 2.1 引言 | 第40页 |
| 2.2 实验材料与仪器设备 | 第40-43页 |
| 2.2.1 实验动物与所需菌种 | 第40-42页 |
| 2.2.2 实验用抗体 | 第42页 |
| 2.2.3 所需培养基 | 第42页 |
| 2.2.4 主要溶液及试剂 | 第42-43页 |
| 2.2.5 主要仪器设备 | 第43页 |
| 2.3 实验方法 | 第43-45页 |
| 2.3.1 抗体的制备 | 第43-44页 |
| 2.3.2 效价测定 | 第44页 |
| 2.3.3 抗体的纯化 | 第44页 |
| 2.3.4 抗体的HRP标记 | 第44-45页 |
| 2.3.5 抗体的配对筛选 | 第45页 |
| 2.3.6 抗体对特异性分析 | 第45页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第45-50页 |
| 2.4.1 三种食源性致病菌抗血清纯化后抗体的效价 | 第45-46页 |
| 2.4.2 HRP标记后抗体的工作浓度 | 第46-47页 |
| 2.4.3 抗体配对分析 | 第47-48页 |
| 2.4.4 抗体对特异性分析 | 第48-50页 |
| 2.5 小结 | 第50-51页 |
| 第三章 磁珠的筛选、免疫磁珠的制备及应用条件研究 | 第51-66页 |
| 3.1 引言 | 第51-52页 |
| 3.2 实验材料及实验仪器 | 第52-54页 |
| 3.2.1 实验所用抗体及菌种 | 第52页 |
| 3.2.2 实验所用磁珠 | 第52页 |
| 3.2.3 实验所需试剂 | 第52-53页 |
| 3.2.4 主要仪器设备 | 第53页 |
| 3.2.5 缓冲液 | 第53-54页 |
| 3.3 实验方法 | 第54-57页 |
| 3.3.1 磁性微球的筛选 | 第54-55页 |
| 3.3.1.1 磁性微球与抗体的偶联方法 | 第54-55页 |
| 3.3.1.2 偶联过程中蛋白质浓度的测定方法 | 第55页 |
| 3.3.1.3 磁性微球性能观察 | 第55页 |
| 3.3.1.4 不同抗体浓度对微球偶联的影响 | 第55页 |
| 3.3.2 磁性微球的粒径分布 | 第55-56页 |
| 3.3.3 免疫磁珠的应用条件 | 第56页 |
| 3.3.3.1 免疫磁珠添加量对致病菌捕获率的影响 | 第56页 |
| 3.3.3.2 捕获时间对捕获率的影响 | 第56页 |
| 3.3.3.3 不同食品基质对免疫磁珠捕获率的影响 | 第56页 |
| 3.3.3.4 食品基质稀释倍数对免疫磁珠捕获率的影响 | 第56页 |
| 3.3.4 数据处理 | 第56-57页 |
| 3.4 结果与分析 | 第57-64页 |
| 3.4.1 BCA测定蛋白标准曲线 | 第57页 |
| 3.4.2 磁珠的筛选及磁珠性状分析 | 第57-59页 |
| 3.4.3 微球上抗体的偶联量 | 第59-60页 |
| 3.4.4 磁珠添加量对致病菌捕获率的影响 | 第60-61页 |
| 3.4.5 捕获时间对捕获率的影响 | 第61-62页 |
| 3.4.6 不同食品基质对免疫磁珠捕获率的影响 | 第62-63页 |
| 3.4.7 基质的稀释倍数对免疫磁珠捕获的影响 | 第63-64页 |
| 3.5 讨论 | 第64-65页 |
| 3.6 小结 | 第65-66页 |
| 第四章 基于荧光微球的免疫层析平台的建立及评价 | 第66-82页 |
| 4.1 引言 | 第66页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第66-67页 |
| 4.2.1 实验菌种及抗体对 | 第66页 |
| 4.2.2 主要试剂及仪器设备 | 第66-67页 |
| 4.3 实验方法 | 第67-70页 |
| 4.3.1 FM与抗体偶联 | 第67页 |
| 4.3.2 ICA试纸条的制备 | 第67-68页 |
| 4.3.3 FM-ICA检测程序 | 第68页 |
| 4.3.4 FM-ICA试纸条优化 | 第68-69页 |
| 4.3.3.1 FM上偶联抗体量对检测的影响 | 第68页 |
| 4.3.3.2 FM-pab的稀释倍数 | 第68页 |
| 4.3.3.3 T线抗体浓度对检测的影响 | 第68-69页 |
| 4.3.3.4 层析时间对检测的影响 | 第69页 |
| 4.3.5 FM-ICA检测评价 | 第69页 |
| 4.3.4.1 LOD、LOQ及线性关系 | 第69页 |
| 4.3.4.2 FM-ICA回收率 | 第69页 |
| 4.3.4.3 FM-ICA精密度 | 第69页 |
| 4.3.4.4 FM-ICA稳定性 | 第69页 |
| 4.3.4.5 FM-ICA特异性 | 第69页 |
| 4.3.4.6 FM-ICA对模拟样品检测 | 第69页 |
| 4.3.6 数据处理 | 第69-70页 |
| 4.4 结果与分析 | 第70-79页 |
| 4.4.1 FM与抗体的偶联 | 第70页 |
| 4.4.2 FM-ICA试纸条优化 | 第70-73页 |
| 4.4.2.1 抗体标记浓度 | 第70页 |
| 4.4.2.2 FM-pab的稀释倍数 | 第70-71页 |
| 4.4.2.3 T线抗体浓度对检测的影响 | 第71-72页 |
| 4.4.2.4 T值、C值及HT/HC值随层析时间的动力学变化 | 第72-73页 |
| 4.4.3 试纸条性能评价 | 第73-77页 |
| 4.3.3.1 敏感性评价 | 第73-75页 |
| 4.3.3.2 回收率评价 | 第75-76页 |
| 4.3.3.3 精密度分析 | 第76-77页 |
| 4.3.3.4 稳定性评价 | 第77页 |
| 4.3.3.5 特异性评价 | 第77页 |
| 4.4.4 食品基质对FM-ICA检测的影响 | 第77-79页 |
| 4.5 讨论 | 第79-81页 |
| 4.5.1 FM-ICA检测的敏感性 | 第79页 |
| 4.5.2 FM-ICA检测的准确度 | 第79-81页 |
| 4.5.3 食品基质对FM-ICA检测的影响 | 第81页 |
| 4.6 小结 | 第81-82页 |
| 第五章 FM-ICA+IMS快速检测食品中的鼠伤寒沙门氏菌 | 第82-91页 |
| 5.1 引言 | 第82-83页 |
| 5.2 实验材料与方法 | 第83-85页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第83页 |
| 5.2.1.1 实验菌株及培养条件 | 第83页 |
| 5.2.1.2 试剂及仪器 | 第83页 |
| 5.2.2 方法 | 第83-85页 |
| 5.2.2.1 磁性微球与抗体偶联 | 第83-84页 |
| 5.2.2.2 荧光微球与抗体偶联 | 第84页 |
| 5.2.2.3 FM-ICA试纸条的制备 | 第84页 |
| 5.2.2.4 IMB洗脱方式 | 第84页 |
| 5.2.2.5 FM-ICA+IMS对模拟样本的定性检测 | 第84-85页 |
| 5.2.2.6 IMB+FM-ICA对模拟样本低浓度鼠伤寒沙门氏菌的特异性 | 第85页 |
| 5.2.2.7 IMB+FM-ICA对自然存在样本检测的可行性分析 | 第85页 |
| 5.2.2.8 数据处理 | 第85页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第85-90页 |
| 5.3.1 FM-ICA制备 | 第85-86页 |
| 5.3.2 不同洗脱剂对IMB洗脱比较 | 第86-87页 |
| 5.3.3 不同洗脱时间对IMB洗脱率的影响 | 第87页 |
| 5.3.4 FM-ICA+IMS的模拟检测 | 第87-88页 |
| 5.3.5 FM-ICA+IMS在低浓度食物样本中的特异性 | 第88-90页 |
| 5.3.6 FM-ICA+IMS在自然状态下食物样本中的检测 | 第90页 |
| 5.4 小结 | 第90-91页 |
| 第六章 基于荧光微球的免疫层析法结合免疫磁珠分离技术快速检测E.coliO157:H774 | 第91-105页 |
| 6.1 引言 | 第91-92页 |
| 6.2 材料与方法 | 第92-96页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第92-93页 |
| 6.2.1.1 实验菌株 | 第92-93页 |
| 6.2.1.2 实验试剂及仪器设备 | 第93页 |
| 6.2.1.3 主要溶液的配制 | 第93页 |
| 6.2.2 免疫磁珠的制备 | 第93-94页 |
| 6.2.3 免疫磁珠的优化 | 第94页 |
| 6.2.4 FM-ICA的制备 | 第94-96页 |
| 6.2.4.1 荧光微球与抗体偶联 | 第94页 |
| 6.2.4.2 ICA试纸条的制备 | 第94-95页 |
| 6.2.4.3 FM-ICA检测程序 | 第95页 |
| 6.2.4.4 FM-ICA性能评价 | 第95页 |
| 6.2.4.5 IMS-FICA检测模拟样本 | 第95-96页 |
| 6.3 结果与分析 | 第96-103页 |
| 6.3.1 免疫磁珠的制备与优化 | 第96-97页 |
| 6.3.2 FM-ICA试纸条的制备 | 第97-99页 |
| 6.3.3 FM-ICA评价 | 第99-102页 |
| 6.3.3.1 敏感性分析 | 第99-100页 |
| 6.3.3.2 特异性分析 | 第100-101页 |
| 6.3.3.3 准确度与精密度分析 | 第101页 |
| 6.3.3.4 稳定性分析 | 第101-102页 |
| 6.3.4 IMS+FICA对食品样本的模拟检测 | 第102-103页 |
| 6.4 讨论 | 第103-104页 |
| 6.5 小结 | 第104-105页 |
| 第七章 CdSe/ZnS-聚苯乙烯荧光微球的制备及在副溶血弧菌快速检测中的应用 | 第105-118页 |
| 7.1 前言 | 第105页 |
| 7.2 实验材料与方法 | 第105-109页 |
| 7.2.1 实验材料及试剂 | 第105-106页 |
| 7.2.2 实验菌株 | 第106页 |
| 7.2.3 实验所需仪器 | 第106-107页 |
| 7.2.4 实验方法 | 第107-109页 |
| 7.2.4.1 量子点的合成方法 | 第107-108页 |
| 7.2.4.2 CdSe/ZnS-聚苯乙烯荧光微球的合成 | 第108页 |
| 7.2.4.3 QD-PS荧光微球与抗体偶联 | 第108-109页 |
| 7.2.4.4 免疫层析卡的制备 | 第109页 |
| 7.2.4.5 QD-PS-ICA检测评价 | 第109页 |
| 7.3 结果与分析 | 第109-115页 |
| 7.3.1 QD的合成结果 | 第109-110页 |
| 7.3.2 QD的包裹 | 第110-111页 |
| 7.3.3 QD-PS-ICA评价 | 第111-115页 |
| 7.3.3.1 QD-PS-ICA对菌液检测的敏感性分析 | 第111-113页 |
| 7.3.3.2 QD-PS-ICA检测准确度和精密度分析 | 第113页 |
| 7.3.3.3 QD-PS-ICA检测特异性分析 | 第113页 |
| 7.3.3.4 QD-PS-ICA检测稳定性分析 | 第113-115页 |
| 7.3.3.5 不同食品基质对QD-PS-ICA检测的影响 | 第115页 |
| 7.4 讨论 | 第115-117页 |
| 7.5 小结 | 第117-118页 |
| 结论与展望 | 第118-120页 |
| 一、结论 | 第118-119页 |
| 二、本论文的主要创新点 | 第119页 |
| 三、展望 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-141页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第141-142页 |
| 致谢 | 第142-143页 |
| 附件 | 第143页 |
