| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略语 | 第8-14页 |
| 第1章 前言 | 第14-25页 |
| 1.1 单链抗体 | 第14-20页 |
| 1.1.1 单链抗体的结构与功能 | 第14页 |
| 1.1.2 单链抗体分子展示系统 | 第14-16页 |
| 1.1.3 单链抗体库的分类 | 第16-17页 |
| 1.1.4 单链抗体表达系统 | 第17-18页 |
| 1.1.5 单链抗体在分子诊断中的应用 | 第18-20页 |
| 1.2 伏马菌素及其分析检测方法研究进展 | 第20-23页 |
| 1.2.1 伏马菌素及其理化性质 | 第20页 |
| 1.2.2 伏马菌素的危害及其限量标准 | 第20-21页 |
| 1.2.3 伏马菌素的检测方法 | 第21-23页 |
| 1.3 主要研究内容和意义 | 第23-25页 |
| 1.3.1 主要研究内容 | 第23页 |
| 1.3.2 研究意义 | 第23-25页 |
| 第2章 抗伏马菌素B_1单克隆抗体的制备和单链抗体的克隆与鉴定 | 第25-51页 |
| 2.1 材料、仪器与试剂 | 第25-28页 |
| 2.1.1 主要材料 | 第25页 |
| 2.1.2 PCR引物 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第26页 |
| 2.1.4 生化试剂 | 第26页 |
| 2.1.5 主要溶液和培养基 | 第26-28页 |
| 2.2 方法与步骤 | 第28-37页 |
| 2.2.1 FB_1人工抗原的合成与鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.2 小鼠免疫与抗血清测定 | 第29页 |
| 2.2.3 单克隆抗体制备 | 第29页 |
| 2.2.4 单克隆抗体特性鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.5 杂交瘤细胞总RNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.6 RT-PCR合成1 st-Strand cDNA | 第30-31页 |
| 2.2.7 重链、轻链可变区基因(V_H、V_L)的扩增 | 第31页 |
| 2.2.8 scFv基因的组装与扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.9 质粒的提取 | 第32页 |
| 2.2.10 噬菌粒的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.11 E.coli TG1电转感受态细胞的制备与电转化 | 第33-34页 |
| 2.2.12 辅助噬菌体M13K07滴度测定与扩增 | 第34-35页 |
| 2.2.13 抗FB_1单克隆噬菌体的筛选与鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.14 抗FB_1单链抗体克隆序列比对、理化性质和空间结构预测 | 第36页 |
| 2.2.15 分析V_H与V_L间配对专一性 | 第36-37页 |
| 2.2.16 单链抗体噬菌体的扩增与纯化 | 第37页 |
| 2.2.17 单链抗体phage-ELISA标准曲线建立 | 第37页 |
| 2.3 结果与分析 | 第37-47页 |
| 2.3.1 FB_1人工抗原的合成与鉴定 | 第37页 |
| 2.3.2 小鼠抗血清效价与特异性 | 第37-39页 |
| 2.3.3 单克隆抗体特性 | 第39页 |
| 2.3.4 杂交瘤细胞总RNA的提取与鉴定 | 第39-40页 |
| 2.3.5 V_H、V_L基因的PCR扩增 | 第40页 |
| 2.3.6 scFv基因的组装与扩增 | 第40-41页 |
| 2.3.7 菌落PCR验证电转化产物阳性率 | 第41页 |
| 2.3.8 phage-ELISA验证噬菌体单克隆 | 第41-43页 |
| 2.3.9 scFv序列对比、理化性质与空间结构预测分析 | 第43-46页 |
| 2.3.10 分析V_H与V_L间配对专一性 | 第46页 |
| 2.3.11 单链抗体phage-ELISA竞争抑制曲线的建立 | 第46-47页 |
| 2.4 讨论 | 第47-50页 |
| 2.4.1 FB_1人工抗原合成方法与抗体特异性之间的关系 | 第47-48页 |
| 2.4.2 单链抗体基因的扩增与鉴定 | 第48-49页 |
| 2.4.3 单链抗体序列与构象 | 第49-50页 |
| 2.5 小结 | 第50-51页 |
| 第3章 抗伏马菌素B_1单链抗体的原核表达及其活性分析 | 第51-68页 |
| 3.1 材料、仪器和试剂 | 第52-53页 |
| 3.1.1 主要材料 | 第52页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第52页 |
| 3.1.3 生化试剂 | 第52页 |
| 3.1.4 主要溶液和培养基 | 第52-53页 |
| 3.2 方法与步骤 | 第53-58页 |
| 3.2.1 CaCl2转化法感受态细胞的制备 | 第53页 |
| 3.2.2 表达载体的构建 | 第53-56页 |
| 3.2.3 scFv-1D11诱导表达条件的优化 | 第56-57页 |
| 3.2.4 MBP-scFv和scFv-AP诱导表达 | 第57页 |
| 3.2.5 SDS-PAGE分析目的蛋白 | 第57页 |
| 3.2.6 scFv-1D11和scFv-AP包涵体的变性、纯化与复性 | 第57-58页 |
| 3.2.7 scFv(1D11)活性分析 | 第58页 |
| 3.2.8 scFv-AP活性分析 | 第58页 |
| 3.3 结果与分析 | 第58-66页 |
| 3.3.1 表达载体pET22b-1D11的构建 | 第58-59页 |
| 3.3.2 表达载体pMAL-1D11的构建 | 第59-60页 |
| 3.3.3 表达载体pET22b-1D11-AP的构建 | 第60页 |
| 3.3.4 scFv(1D11)诱导表达条件的优化与目标蛋白表达形式分析 | 第60-62页 |
| 3.3.5 MBP-scFv融合蛋白诱导表达 | 第62页 |
| 3.3.6 scFv(1D11)包涵体纯化与复性 | 第62-63页 |
| 3.3.7 scFv(1D11)活性分析 | 第63-64页 |
| 3.3.8 scFv-AP融合蛋白的诱导表达 | 第64-65页 |
| 3.3.9 scFv-AP融合蛋白的活性分析 | 第65-66页 |
| 3.4 讨论 | 第66-67页 |
| 3.4.1 单链抗体的原核表达 | 第66-67页 |
| 3.4.2 酶标抗体的生物合成 | 第67页 |
| 3.5 小结 | 第67-68页 |
| 第4章 基于单链抗体建立玉米中伏马菌素B_1的间接竞争ELISA检测方法 | 第68-77页 |
| 4.1 材料、仪器和试剂 | 第68页 |
| 4.1.1 主要材料与试剂 | 第68页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第68页 |
| 4.2 方法与步骤 | 第68-70页 |
| 4.2.1 间接竞争ELISA检测过程 | 第68-69页 |
| 4.2.2 单链抗体热稳定性分析 | 第69页 |
| 4.2.3 甲醇溶度对基于单链抗体的ELISA体系影响 | 第69页 |
| 4.2.4 玉米样品前处理 | 第69-70页 |
| 4.2.5 检测容量(CCβ)和最低检出限(LOD)的确定 | 第70页 |
| 4.2.6 样品加标回收率的测定 | 第70页 |
| 4.2.7 HPLC方法确证 | 第70页 |
| 4.3 结果与分析 | 第70-75页 |
| 4.3.1 单链抗体热稳定性分析 | 第70-72页 |
| 4.3.2 甲醇浓度对基于单链抗体的ELISA体系的影响 | 第72-73页 |
| 4.3.3 检测容量和最低检出限 | 第73-74页 |
| 4.3.4 样品加标回收率 | 第74页 |
| 4.3.5 间接竞争ELISA和HPLC方法测定结果比较 | 第74-75页 |
| 4.4 讨论 | 第75-76页 |
| 4.5 小结 | 第76-77页 |
| 第5章 结论与展望 | 第77-79页 |
| 5.1 结论 | 第77-78页 |
| 5.2 展望 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第88页 |
