| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第10-26页 |
| 1.1 兽药残留概述 | 第10-13页 |
| 1.1.1 我国兽药残留现状 | 第10-11页 |
| 1.1.2 兽药残留产生的原因 | 第11-12页 |
| 1.1.3 兽药残留的危害 | 第12-13页 |
| 1.2 氯霉素概述 | 第13-19页 |
| 1.2.1 氯霉素简介 | 第13-15页 |
| 1.2.2 氯霉素代谢及残留危害 | 第15-16页 |
| 1.2.3 氯霉素的残留现状 | 第16-18页 |
| 1.2.4 氯霉素残留检测方法 | 第18-19页 |
| 1.3 基因工程抗体 | 第19-21页 |
| 1.3.1 基因工程抗体简介 | 第19页 |
| 1.3.2 常见的几种基因工程抗体 | 第19-21页 |
| 1.4 酶联免疫技术 | 第21-24页 |
| 1.4.1 完全抗原的制备 | 第21页 |
| 1.4.2 载体蛋白的选择 | 第21-22页 |
| 1.4.3 抗体的获得 | 第22-23页 |
| 1.4.4 碱性磷酸酶标记抗体的酶联免疫分析 | 第23-24页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 1.6 研究内容 | 第25-26页 |
| 2 材料和方法 | 第26-49页 |
| 2.1 材料 | 第26-32页 |
| 2.1.1 实验用菌种及细胞 | 第26页 |
| 2.1.2 实验用工具酶、抗生素及标准品 | 第26页 |
| 2.1.3 实验用试剂及试剂盒 | 第26-28页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.5 PCR所用的引物 | 第29-30页 |
| 2.1.6 主要溶液和培养基的配置方法 | 第30-31页 |
| 2.1.7 待测样品 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-49页 |
| 2.2.1 氯霉素单克隆细胞总RNA的提取及重链和轻链可变区的扩增 | 第32-35页 |
| 2.2.2 重链和轻链可变区的序列测定与分析 | 第35-38页 |
| 2.2.3 氯霉素单链抗体基因的扩增 | 第38-39页 |
| 2.2.4 CAP scFv-pLIP6/GN表达质粒的构建 | 第39-42页 |
| 2.2.5 CAP scFv-pLIP6/GN重组质粒的表达 | 第42-44页 |
| 2.2.6 氯霉素包被原的合成 | 第44-45页 |
| 2.2.7 氯霉素间接竞争ELISA检测方法的优化 | 第45-47页 |
| 2.2.8 氯霉素ELISA检测方法性能指标的评价 | 第47页 |
| 2.2.9 间接竞争ELISA法用于实际样品的检测 | 第47-49页 |
| 3 结果与讨论 | 第49-73页 |
| 3.1 氯霉素单克隆细胞总RNA的提取及重链和轻链可变区的扩增 | 第49-50页 |
| 3.1.1 氯霉素单克隆细胞总RNA的提取 | 第49页 |
| 3.1.2 cDNA第一链的合成及重链和轻链可变区的扩增 | 第49-50页 |
| 3.2 重链和轻链可变区的序列测定及分析 | 第50-53页 |
| 3.2.1 重链和轻链可变区的基因序列测定 | 第50-51页 |
| 3.2.2 Fab段氨基酸序列的测定 | 第51-52页 |
| 3.2.3 序列分析 | 第52-53页 |
| 3.3 氯霉素单链抗体基因的扩增 | 第53-54页 |
| 3.4 CAP scFv-pLIP6/GN表达质粒的构建 | 第54-57页 |
| 3.4.1 CAP scFv-pMD18-T重组质粒的构建 | 第54-55页 |
| 3.4.2 CAP scFv-pLIP6/GN表达质粒的构建 | 第55-57页 |
| 3.5 CAP scFv-pLIP6/GN重组质粒的表达 | 第57-60页 |
| 3.5.1 CAP scFv-pLIP6/GN-BL21(DE3)表达菌株的制备 | 第57-58页 |
| 3.5.2 诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第58-59页 |
| 3.5.3 CAP scFv-AP融合蛋白的纯化 | 第59-60页 |
| 3.6 氯霉素包被原的合成 | 第60-61页 |
| 3.7 氯霉素间接竞争ELISA检测方法的建立 | 第61-65页 |
| 3.7.1 氯霉素间接竞争ELISA检测方法的优化 | 第61-65页 |
| 3.7.2 氯霉素间接竞争ELISA方法的建立 | 第65页 |
| 3.8 ELISA检测方法性能指标的评价 | 第65-68页 |
| 3.8.1 检测限与灵敏度 | 第65页 |
| 3.8.2 精密度 | 第65-67页 |
| 3.8.3 氯霉素抗体特异性的测定 | 第67-68页 |
| 3.9 间接竞争ELISA检测方法用于样品检测 | 第68-73页 |
| 3.9.1 基质影响的消除 | 第69-71页 |
| 3.9.2 样品的添加回收实验 | 第71-73页 |
| 4 结论 | 第73-74页 |
| 5 展望 | 第74-75页 |
| 6 参考文献 | 第75-80页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第80-81页 |
| 8 致谢 | 第81页 |
