| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1.1 苯基乳酸的分布与性质 | 第13页 |
| 1.2 苯基乳酸的功能与应用 | 第13-15页 |
| 1.2.1 抑菌作用 | 第13-14页 |
| 1.2.2 药理作用 | 第14页 |
| 1.2.3 苯基乳酸的应用 | 第14-15页 |
| 1.3 生物法生产苯基乳酸的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.3.1 微生物发酵法 | 第15-16页 |
| 1.3.2 生物催化法 | 第16-18页 |
| 1.4 辅酶再生体系 | 第18-20页 |
| 1.4.1 辅酶NAD(P)H的酶法再生 | 第18-19页 |
| 1.4.2 常用的辅酶NAD(P)H辅酶再生体系 | 第19-20页 |
| 1.4.2.1 甲酸脱氢酶再生NADH体系 | 第19页 |
| 1.4.2.2 GDH再生NADPH体系 | 第19-20页 |
| 1.5 人工合成融合蛋白的应用与构建 | 第20-22页 |
| 1.5.1 人工合成融合蛋白在辅酶再生领域的应用 | 第20-21页 |
| 1.5.2 人工合成融合蛋白的构建 | 第21-22页 |
| 1.6 本论文的研究意义及内容 | 第22-25页 |
| 第二章 融合蛋白D-LDH-Linker-FDH的构建及表达 | 第25-46页 |
| 2.1 前言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料 | 第25-30页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第25-26页 |
| 2.2.2 主要生化试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.3 实验试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2.2.4 仪器设备 | 第28-29页 |
| 2.2.5 培养基的配制 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-37页 |
| 2.3.1 乳酸脱氢酶基因的扩增 | 第30-31页 |
| 2.3.1.1 质粒的提取 | 第30页 |
| 2.3.1.2 乳酸脱氢酶基因的PCR扩增 | 第30-31页 |
| 2.3.2 琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物 | 第31-32页 |
| 2.3.3 乳酸脱氢酶PCR扩增产物的纯化与回收 | 第32页 |
| 2.3.4 大肠杆菌高效感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 2.3.5 乳酸脱氢酶与pMD19-T Simple Vector连接与转化 | 第32-33页 |
| 2.3.6 甲酸脱氢酶的基因克隆 | 第33页 |
| 2.3.7 融合基因重组表达质粒的构建与鉴定 | 第33-35页 |
| 2.3.7.1 融合基因的构建 | 第33-34页 |
| 2.3.7.2 重组质粒的构建与鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.8 融合蛋白的诱导、表达 | 第35页 |
| 2.3.9 12%SDS-PAGE鉴定融合蛋白 | 第35-36页 |
| 2.3.10 融合蛋白生物学活性的鉴定 | 第36-37页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第37-44页 |
| 2.4.1 乳酸脱氢酶、甲酸脱氢酶基因的克隆 | 第37-39页 |
| 2.4.2 融合基因的构建 | 第39-40页 |
| 2.4.3 克隆载体pMD19-T-d-ldh-linker-fdh的构建、转化与验证 | 第40-41页 |
| 2.4.4 表达载体pET-28a-d-ldh-linker-fdh的构建、转化与验证 | 第41-42页 |
| 2.4.5 重组大肠杆菌融合蛋白的诱导表达 | 第42-43页 |
| 2.4.6 融合蛋白生物学活性的检测 | 第43-44页 |
| 2.5 本章小结 | 第44-46页 |
| 第三章 融合蛋白合成D-苯基乳酸的诱导条件优化 | 第46-56页 |
| 3.1 前言 | 第46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.2.1 菌种和质粒 | 第46-47页 |
| 3.2.2 主要生化试剂及相关试剂的配制 | 第47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-48页 |
| 3.3.1 菌体培养及生物转化方法 | 第47页 |
| 3.3.2 高效液相色谱苯基乳酸的测定 | 第47页 |
| 3.3.3 重组菌诱导条件的优化 | 第47-48页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第48-55页 |
| 3.4.1 重组大肠杆菌全细胞转化苯丙酮酸生成苯基乳酸 | 第48页 |
| 3.4.2 诱导条件的优化 | 第48-55页 |
| 3.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 第四章 转化条件及底物分批补加方式的优化 | 第56-66页 |
| 4.1 前言 | 第56页 |
| 4.2 实验材料 | 第56-57页 |
| 4.2.1 菌种与质粒 | 第56页 |
| 4.2.2 试验试剂及配置 | 第56页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第56-57页 |
| 4.3 实验方法 | 第57页 |
| 4.3.1 重组大肠杆菌转化条件的优化 | 第57页 |
| 4.3.2 重组大肠单批次转化合成苯基乳酸速率的考察 | 第57页 |
| 4.3.3 分批流加底物合成苯基乳酸 | 第57页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第57-65页 |
| 4.4.1 转化条件的优化 | 第57-60页 |
| 4.4.2 不同重组大肠杆菌转化生产苯基乳酸的比较 | 第60-61页 |
| 4.4.3 不同菌株单转化生产苯基乳酸速率的考察 | 第61-62页 |
| 4.4.4 分批补加底物合成苯基乳酸 | 第62-65页 |
| 4.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 总结与展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 附录 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
