| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第16-27页 |
| 1.1 食物过敏的研究进展 | 第16-23页 |
| 1.1.1 食品过敏概述 | 第16-17页 |
| 1.1.2 食物过敏的免疫机制 | 第17-18页 |
| 1.1.3 食物变应原 | 第18-19页 |
| 1.1.4 食物变应原的鉴定 | 第19-21页 |
| 1.1.4.1 食物过敏动物模型 | 第19-20页 |
| 1.1.4.2 变应原鉴定的蛋白质组学和免疫学 | 第20-21页 |
| 1.1.5 食物变应原的致敏机理 | 第21-23页 |
| 1.1.5.1 变应原的抗原表位 | 第21-22页 |
| 1.1.5.2 变应原的分子模拟研究 | 第22-23页 |
| 1.2 家蚕蛹变应原的研究进展 | 第23-24页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 1.4 本研究的主要内容 | 第25-27页 |
| 第二章 家蚕蛹蛋白小鼠食物过敏模型构建研究 | 第27-47页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 实验材料与设备 | 第27-33页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.2.2 主要仪器与设备 | 第28页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第28-29页 |
| 2.2.4 部分试剂及溶液配制 | 第29-33页 |
| 2.3 试验方法 | 第33-36页 |
| 2.3.1 家蚕蛹粗蛋白提取 | 第33页 |
| 2.3.2 蛋白质的定量 | 第33页 |
| 2.3.3 家蚕蛹蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第33-34页 |
| 2.3.4 试验小鼠的分组、致敏与激发步骤 | 第34页 |
| 2.3.5 小鼠尾静脉注射伊文斯蓝的颜色变化 | 第34页 |
| 2.3.6 试验小鼠眼球取血 | 第34页 |
| 2.3.7 小鼠血清中IgE、组胺、IgG2a、IFN-γ、IL-4、IL-6的测定 | 第34-35页 |
| 2.3.8 试验小鼠取空肠组织及其病理切片与显微观察 | 第35页 |
| 2.3.9 家蚕蛹变应原蛋白的Western blot鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3.10 统计学分析 | 第36页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第36-46页 |
| 2.4.1 家蚕蛹粗蛋白的定量 | 第36-37页 |
| 2.4.2 家蚕蛹粗蛋白的SDS-PAGE凝胶电泳 | 第37页 |
| 2.4.3 不同致敏方式对尾注伊文斯蓝的影响 | 第37-38页 |
| 2.4.4 不同处理方式对小鼠空肠组织的影响（H&E染色及SEM超微观察） | 第38-40页 |
| 2.4.5 不同处理方式对小鼠血清中IgE含量的影响 | 第40-41页 |
| 2.4.6 不同处理方式对小鼠血清中组胺含量的影响 | 第41-42页 |
| 2.4.7 不同致敏方式对小鼠血清中IL-4、IL-6、IFN-γ含量的影响 | 第42-44页 |
| 2.4.8 蚕蛹蛋白变应原的SDS-PAGE-Western Blot鉴定 | 第44-46页 |
| 2.5 本章小结 | 第46-47页 |
| 第三章 家蚕蛹蛋白食物致敏变应原的鉴定分析 | 第47-76页 |
| 3.1 引言 | 第47页 |
| 3.2 实验材料与设备 | 第47-50页 |
| 3.2.1实验材料 | 第47-48页 |
| 3.2.1.1小鼠血清 | 第47-48页 |
| 3.2.1.2 人血清 | 第48页 |
| 3.2.1.3 蚕蛹样品 | 第48页 |
| 3.2.2 主要仪器与设备 | 第48-49页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第49-50页 |
| 3.3 试验方法 | 第50-56页 |
| 3.3.1 双向电泳用家蚕蛹蛋白质提取及纯化 | 第50页 |
| 3.3.2 提取蛋白的定量分析 | 第50页 |
| 3.3.3 蚕蛹蛋白的双向电泳 | 第50-55页 |
| 3.3.3.1 一向等点聚焦 | 第50-51页 |
| 3.3.3.2 双向SDS-PAGE | 第51-53页 |
| 3.3.3.3 Western blot实验 | 第53页 |
| 3.3.3.4 蛋白点的质谱（MOLDI-TOF-MS/MS）鉴定 | 第53-55页 |
| 3.3.4 质谱结果的数据库检索与分析 | 第55页 |
| 3.3.5 致敏蛋白鉴定与分析 | 第55页 |
| 3.3.6 家蚕蛹主要变应原的分析 | 第55-56页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第56-75页 |
| 3.4.1 免疫印迹反应血清稀释度的确定 | 第56-57页 |
| 3.4.2 家蚕蛹小鼠食用过敏变应原的鉴定与分析 | 第57-68页 |
| 3.4.2.1 低分子量家蚕蛹变应原的双向电泳及Western blot免疫印迹反应 | 第57-59页 |
| 3.4.2.2 高分子量家蚕蛹变应原的双向电泳及Western blot免疫印迹反应 | 第59-61页 |
| 3.4.2.3 免疫印迹蛋白质斑点的质谱鉴定 | 第61-68页 |
| 3.4.3 家蚕蛹人食用过敏变应原的鉴定与分析 | 第68-73页 |
| 3.4.3.1 家蚕蛹变应原蛋白的双向电泳及Western blot免疫印迹反应 | 第68-69页 |
| 3.4.3.2 免疫印迹蛋白质斑点的质谱鉴定 | 第69-73页 |
| 3.4.4 家蚕蛹主要变应原的分析 | 第73-75页 |
| 3.5 小节 | 第75-76页 |
| 第四章 家蚕蛹优势变应原BmChi线性抗原表位的预测及初步鉴定 | 第76-106页 |
| 4.1 引言 | 第76-77页 |
| 4.2 实验材料与设备 | 第77-78页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第77页 |
| 4.2.2 主要仪器与设备 | 第77页 |
| 4.2.3 其它试剂及其配制 | 第77-78页 |
| 4.3 试验方法 | 第78-85页 |
| 4.3.1 BmChi与不同来源几丁质酶及几丁质酶变应原蛋白序列的同源性分析 | 第78-82页 |
| 4.3.2 BmChi蛋白二级结构一致性预测与分析 | 第82页 |
| 4.3.3 BmChi蛋白的亲疏水性预测与分析 | 第82页 |
| 4.3.4 BmChi蛋白的可塑性预测与分析 | 第82页 |
| 4.3.5 BmChi蛋白的抗原性预测与分析 | 第82页 |
| 4.3.6 BmChi蛋白的表面可及性预测与分析 | 第82页 |
| 4.3.7 BmChi蛋白B细胞抗原表位的预测与分析 | 第82-83页 |
| 4.3.8 BmChi抗原表位的综合分析 | 第83页 |
| 4.3.9 BmChi抗原表位线性重叠肽段的合成 | 第83页 |
| 4.3.10 小鼠抗血清的制备 | 第83页 |
| 4.3.11 BmChi重叠肽的ELISA反应 | 第83-85页 |
| 4.3.12 BmChi抗原表位肽段的设计与合成 | 第85页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第85-105页 |
| 4.4.1 BmChi与不同来源几丁质酶的同源分析 | 第85-87页 |
| 4.4.2 BmChi与不同几丁质酶变应原的同源分析 | 第87-90页 |
| 4.4.3 BmChi蛋白的二级结构预测 | 第90-91页 |
| 4.4.4 BmChi蛋白的亲疏水性预测与分析 | 第91-92页 |
| 4.4.5 BmChi蛋白的可塑性预测与分析 | 第92-93页 |
| 4.4.6 BmChi蛋白的抗原性预测与分析 | 第93页 |
| 4.4.7 BmChi蛋白的表面可及性预测与分析 | 第93-94页 |
| 4.4.8 BmChi蛋白B细胞抗原表位的预测与分析 | 第94-96页 |
| 4.4.9 BmChi抗原表位的综合分析 | 第96-97页 |
| 4.4.10 BmChi重叠肽段的ELISA检测 | 第97-102页 |
| 4.4.11 BmChi重叠肽中优势抗原表位肽段的设计与合成及ELISA检测 | 第102-105页 |
| 4.5 本章小结 | 第105-106页 |
| 第五章 BmChi蛋白的同源模建与分子动力学模拟 | 第106-148页 |
| 5.1 前言 | 第106页 |
| 5.2 实验仪器和软件 | 第106-107页 |
| 5.2.1 分子模拟设备 | 第106页 |
| 5.2.2 分子动力学模拟软件 | 第106-107页 |
| 5.3 研究方法 | 第107-110页 |
| 5.3.1 BmChi蛋白三维机构建模 | 第107页 |
| 5.3.1.1 模板选择 | 第107页 |
| 5.3.1.2 BmChi蛋白的同源建模及模型优化 | 第107页 |
| 5.3.1.3 BmChi三维建模的评价 | 第107页 |
| 5.3.2 BmChi与小鼠IgE抗体Fv片段的分子对接研究 | 第107-108页 |
| 5.3.2.1 分子对接片段的选择 | 第107-108页 |
| 5.3.2.2 BmChi抗原表位的分析 | 第108页 |
| 5.3.2.3 抗原蛋白-抗体蛋白复合物分子对接的结构预测 | 第108页 |
| 5.3.2.4 抗原蛋白-抗体蛋白复合物的氢键和静电分析 | 第108页 |
| 5.3.3 BmChi与小鼠IgE抗体Fv片段的分子动力学模拟研究 | 第108-110页 |
| 5.3.3.1 BmChi与小鼠IgE抗体Fv片段的动力学过程模拟 | 第108-109页 |
| 5.3.3.2 BmChi与小鼠IgE抗体Fv片段的动力学过程模拟的因素考察 | 第109-110页 |
| 5.3.3.3 BmChi与小鼠IgE抗体Fv片段复合物的拉伸动力学模拟 | 第110页 |
| 5.3.3.4 拉伸动力学过程中BmChi与小鼠IgE-Fv复合物解离性、二级结构变化和溶剂可及性表面变化的分析 | 第110页 |
| 5.4 结果与分析 | 第110-146页 |
| 5.4.1 BmChi蛋白三维结构建模 | 第110-118页 |
| 5.4.1.1 BmChi蛋白建模模板的选择 | 第110-112页 |
| 5.4.1.2 BmChi蛋白的同源建模及模型优化 | 第112-114页 |
| 5.4.1.3 BmChi三维建模的PROCHECK评价 | 第114页 |
| 5.4.1.4 BmChi三维建模的Verify 3D评价 | 第114-115页 |
| 5.4.1.5 BmChi活性口袋的比较 | 第115-118页 |
| 5.4.2 BmChi与小鼠IgE抗体复合物的分子对接研究 | 第118-132页 |
| 5.4.2.1 蛋白质-蛋白质复合物分子对接模板的选择 | 第118-119页 |
| 5.4.2.2 BmChi抗原表位肽段的结构分析 | 第119-120页 |
| 5.4.2.3 BmChi蛋白的肽段与小鼠IgE抗体的分子对接模拟 | 第120-124页 |
| 5.4.2.4 BmChi与小鼠IgE抗体片段的结合机制 | 第124-126页 |
| 5.4.2.5 BmChi与小鼠IgE抗体片段分子对接的氢键作用 | 第126-131页 |
| 5.4.2.6 BmChi与小鼠IgE抗体片段分子对接的静电作用 | 第131-132页 |
| 5.4.3 BmChi与小鼠IgE抗体Fv复合物的分子动力学模拟研究 | 第132-140页 |
| 5.4.3.1 BmChi与小鼠IgE抗体Fv片段复合物总体构象变化 | 第132-135页 |
| 5.4.3.2 BmChi与小鼠IgE抗体Fv片段复合物柔性变化 | 第135-137页 |
| 5.4.3.3 BmChi与小鼠IgE抗体Fv片段复合物二级结构变化 | 第137-138页 |
| 5.4.3.4 BmChi与小鼠IgE抗体Fv片段复合物回转半径变化 | 第138页 |
| 5.4.3.5 BmChi与小鼠IgE抗体Fv片段复合物溶剂可及性表面积变化 | 第138-140页 |
| 5.4.4 BmChi与小鼠IgE抗体Fv复合物的拉伸分子动力学模拟研究 | 第140-146页 |
| 5.4.4.1 BmChi与小鼠IgE抗体Fv片段复合物的解离性 | 第141-144页 |
| 5.4.4.2 BmChi与小鼠IgE抗体Fv片段复合物二级结构变化 | 第144-145页 |
| 5.4.4.3 BmChi与小鼠IgE抗体Fv片段复合物溶剂可及性表面积变化 | 第145-146页 |
| 5.5 小结 | 第146-148页 |
| 结论与展望 | 第148-151页 |
| 参考文献 | 第151-164页 |
| 附录一 部分MS谱图 | 第164-167页 |
| 附录二 部分变应原蛋白质斑点的肽段鉴定 | 第167-171页 |
| 附录三 缩写 | 第171-172页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第172-174页 |
| 致谢 | 第174-176页 |
| 附件 | 第176页 |
