| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 引言 | 第12-35页 |
| 1.1 立题背景及意义 | 第12-13页 |
| 1.2 阪崎肠杆菌简介 | 第13-19页 |
| 1.2.1 阪崎肠杆菌的分类 | 第13-14页 |
| 1.2.2 阪崎肠杆菌的生物学特性 | 第14-16页 |
| 1.2.3 阪崎肠杆菌的危害及致病机理 | 第16-19页 |
| 1.3 阪崎肠杆菌的检测方法 | 第19-29页 |
| 1.3.1 传统的分离鉴定方法 | 第19-23页 |
| 1.3.2 分子生物学检测方法 | 第23-27页 |
| 1.3.3 其他检测方法 | 第27-29页 |
| 1.4 实时荧光定量(Real-time)PCR检测技术 | 第29-33页 |
| 1.4.1 Real-time PCR的概述 | 第29页 |
| 1.4.2 Real-time PCR原理 | 第29-32页 |
| 1.4.3 Real-time PCR的特点 | 第32页 |
| 1.4.4 Real-time PCR的应用 | 第32-33页 |
| 1.4.5 LineGeneI~+荧光定量PCR检测仪介绍 | 第33页 |
| 1.5 研究内容 | 第33-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-45页 |
| 2.1 试验材料 | 第35-36页 |
| 2.1.1 试验所用菌株 | 第35页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第35页 |
| 2.1.3 主要培养基和试剂 | 第35-36页 |
| 2.2 试验方法 | 第36-40页 |
| 2.2.1 菌种的培养 | 第36-37页 |
| 2.2.2 细菌基因组DNA的提取 | 第37-38页 |
| 2.2.3 Real-time PCR反应引物、探针序列 | 第38-39页 |
| 2.2.4 Real-time PCR反应体系和反应程序 | 第39页 |
| 2.2.5 阳性对照、阴性对照和空白对照的设置 | 第39-40页 |
| 2.3 Real-time PCR反应条件的优化 | 第40-43页 |
| 2.3.1 引物、探针浓度的优化 | 第40页 |
| 2.3.2 Taq酶的选择和优化 | 第40-41页 |
| 2.3.3 Mg~(2+)浓度优化 | 第41-42页 |
| 2.3.4 dNTPs浓度的优化 | 第42页 |
| 2.3.5 Real-time PCR反应程序的优化 | 第42页 |
| 2.3.6 UDG酶的添加 | 第42-43页 |
| 2.4 阪崎肠杆菌纯培养物的验证 | 第43-44页 |
| 2.4.1 重复性检测 | 第43页 |
| 2.4.2 灵敏度检测 | 第43页 |
| 2.4.3 稳定性检测 | 第43-44页 |
| 2.5 贝因美婴幼儿奶粉样品的验证 | 第44-45页 |
| 2.5.1 与商品化试剂盒的对比验证 | 第44页 |
| 2.5.2 奶粉中阪崎肠杆菌DNA提取方法的优化 | 第44页 |
| 2.5.3 人工污染阪崎肠杆菌奶粉的检出限 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-59页 |
| 3.1 Real-time PCR反应条件的优化 | 第45-49页 |
| 3.1.1 引物、探针浓度的优化 | 第45-46页 |
| 3.1.2 Taq酶的选择和优化 | 第46页 |
| 3.1.3 Mg~(2+)浓度的优化 | 第46-47页 |
| 3.1.4 dNTPs浓度的优化 | 第47-48页 |
| 3.1.5 反应程序的优化 | 第48-49页 |
| 3.1.6 UDG酶的添加 | 第49页 |
| 3.2 阪崎肠杆菌纯培养物的验证 | 第49-53页 |
| 3.2.1 重复性检测 | 第49-50页 |
| 3.2.2 灵敏度检测 | 第50-52页 |
| 3.2.3 稳定性检测 | 第52-53页 |
| 3.3 贝因美婴幼儿奶粉样品的验证 | 第53-59页 |
| 3.3.1 与同类商品化试剂盒的对比验证 | 第53-54页 |
| 3.3.2 奶粉中阪崎肠杆菌DNA提取方法的优化 | 第54-57页 |
| 3.3.3 人工污染奶粉中阪崎肠杆菌的检出限 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-64页 |
| 5 总结与展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
