苯丙氨酸生物合成途径多酶基因协同表达载体的构建
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-11页 |
| 1 引言 | 第11-16页 |
| ·L-Phe生产概况 | 第11-12页 |
| ·生产方法 | 第11页 |
| ·世界生产消费概况 | 第11-12页 |
| ·国内生产消费概况 | 第12页 |
| ·代谢工程及在L-Phe生产中的应用 | 第12-14页 |
| ·代谢工程概述 | 第12页 |
| ·芳香族氨基酸的生物代谢途径 | 第12-14页 |
| ·Phe代谢途径中相关酶的调控 | 第14页 |
| ·L-Phe生物合成的研究与优化 | 第14-16页 |
| ·宿主的选择 | 第14-15页 |
| ·加速限速反应 | 第15页 |
| ·改变代谢流 | 第15页 |
| ·发酵条件的优化 | 第15-16页 |
| ·试验总体思路 | 第16页 |
| 2 实验材料 | 第16-19页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| ·主要设备仪器 | 第16-17页 |
| ·质粒和菌株 | 第17-18页 |
| ·引物 | 第18-19页 |
| 3 方法 | 第19-36页 |
| ·PCR相关引物设计 | 第19页 |
| ·培养基的配制 | 第19-20页 |
| ·LB培养基的配制 | 第19页 |
| ·种子培养基与发酵培养基的配制 | 第19-20页 |
| ·载体和片段的获得 | 第20-24页 |
| ·基因的扩增 | 第20-21页 |
| ·质粒提取 | 第21-22页 |
| ·酶切与连接 | 第22-23页 |
| ·感受态细胞的制备与热激转化 | 第23-24页 |
| ·重组载体的构建 | 第24-29页 |
| ·单基因载体的构建 | 第24-26页 |
| ·两基因串联载体的构建 | 第26-27页 |
| ·三基因串联表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·四基因串联表达载体的构建 | 第28-29页 |
| ·双质粒载体的构建 | 第29-30页 |
| ·三基因载体的构建 | 第29页 |
| ·四基因与五基因载体的构建 | 第29-30页 |
| ·蛋白产物的SDS-PAGE分析 | 第30-32页 |
| ·SDS-PAGE原理 | 第30页 |
| ·试验试剂的制备 | 第30-31页 |
| ·粗酶液的提取 | 第31页 |
| ·凝胶的配制及操作步骤 | 第31-32页 |
| ·工程菌的发酵及其条件的优化 | 第32-36页 |
| ·工程菌的发酵 | 第33-35页 |
| ·工程菌培养条件的优化 | 第35-36页 |
| 4 结果 | 第36-48页 |
| ·单质粒载体的构建 | 第36-39页 |
| ·载体99A-P与99A-T的构建 | 第36-37页 |
| ·载体pZE21-AF的构建 | 第37页 |
| ·载体pZA31-PT的构建 | 第37-38页 |
| ·载体pZE12-AFPT的构建 | 第38页 |
| ·载体pZE12-AGPT的构建 | 第38-39页 |
| ·双质粒载体的构建 | 第39-42页 |
| ·载体KA-AFP和KA-AFT的构建 | 第39-40页 |
| ·载体CA-AFP和CK-AFP的构建 | 第40-41页 |
| ·载体CA-AFPT和CK-AFPT的构建 | 第41页 |
| ·载体CA-AFKPT的构建 | 第41-42页 |
| ·重组子的SDS-PAGE分析 | 第42-44页 |
| ·重组子pZE12-AGPT的表达 | 第42页 |
| ·重组子CK-AFPT的表达 | 第42-43页 |
| ·重组子pZE12-AFPT的表达 | 第43-44页 |
| ·工程菌的发酵 | 第44-45页 |
| ·薄板层析估算苯丙氨酸产量 | 第44页 |
| ·菌体发酵生长曲线的绘制 | 第44-45页 |
| ·培养基的优化 | 第45-47页 |
| ·种子培养基初始pH值对发酵产量的影响 | 第45页 |
| ·种龄的影响 | 第45-46页 |
| ·不同碳源中工程菌的发酵结果 | 第46页 |
| ·正交试验设计结果分析 | 第46-47页 |
| ·高效液相色谱法测量L-Phe产量 | 第47-48页 |
| 5 讨论 | 第48-49页 |
| 6 结论 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |
