| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 中英文对照和缩略词表 | 第9-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-30页 |
| 1.1 酿酒酵母 | 第15-17页 |
| 1.1.1 酿酒酵母简介 | 第15页 |
| 1.1.2 酿酒酵母产燃料乙醇的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2 酿酒酵母糠醛耐受性的研究概况 | 第17-21页 |
| 1.2.1 糠醛对酿酒酵母的影响 | 第17-18页 |
| 1.2.2 酿酒酵母耐受糠醛的能力 | 第18-19页 |
| 1.2.3 提高酿酒酵母糠醛耐受性的策略 | 第19-21页 |
| 1.3 定向进化技术 | 第21-24页 |
| 1.3.1 易错PCR | 第21-22页 |
| 1.3.2 DNA shuffling | 第22-23页 |
| 1.3.3 交错延伸 | 第23页 |
| 1.3.4 体外随机引发重组 | 第23-24页 |
| 1.4 全局调控因子IrrE的研究 | 第24-26页 |
| 1.4.1 IrrE的介绍 | 第24-25页 |
| 1.4.2 IrrE的作用机制 | 第25-26页 |
| 1.4.3 IrrE的应用 | 第26页 |
| 1.5 本论文的研究内容及意义 | 第26-30页 |
| 1.5.1 研究的主要内容 | 第26-28页 |
| 1.5.2 研究的技术路线 | 第28页 |
| 1.5.3 研究的背景及意义 | 第28-30页 |
| 第二章 irrE定向进化提高工业酿酒酵母AS2.489 的糠醛耐受性 | 第30-52页 |
| 2.1 引言 | 第30-31页 |
| 2.2 实验材料 | 第31-33页 |
| 2.2.1 菌种和质粒 | 第31页 |
| 2.2.2 培养基 | 第31页 |
| 2.2.3 工具酶和试剂 | 第31-32页 |
| 2.2.4 主要仪器 | 第32页 |
| 2.2.5 常用溶液的配制 | 第32-33页 |
| 2.3 实验方法 | 第33-42页 |
| 2.3.1 工业酿酒酵母AS2.489 基因组及质粒的提取 | 第33-34页 |
| 2.3.2 引物设计及易错PCR进化野生型irrE | 第34-36页 |
| 2.3.3 p YPKI表达载体突变文库的构建 | 第36-40页 |
| 2.3.4 工业酿酒酵母AS2.489 的电转 | 第40-42页 |
| 2.3.5 耐糠醛突变子的筛选 | 第42页 |
| 2.3.6 糠醛耐性测试 | 第42页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第42-50页 |
| 2.4.1 工业酿酒酵母AS2.489 基因组及质粒 | 第42-43页 |
| 2.4.2 易错PCR体系优化 | 第43-44页 |
| 2.4.3 易错PCR扩增irrE | 第44-45页 |
| 2.4.4 PGK及Kan MX的扩增 | 第45-46页 |
| 2.4.5 重组载体p YPKI的构建 | 第46-48页 |
| 2.4.6 糠醛耐性 | 第48-49页 |
| 2.4.7 FR突变株中的irrE突变位点分析 | 第49-50页 |
| 2.5 本章小结 | 第50-52页 |
| 第三章 FR突变株的性能及耐性机理分析 | 第52-66页 |
| 3.1 引言 | 第52页 |
| 3.2 实验材料 | 第52-53页 |
| 3.2.1 菌种 | 第52-53页 |
| 3.2.2 培养基 | 第53页 |
| 3.2.3 试剂 | 第53页 |
| 3.2.4 主要仪器以及统计分析方法 | 第53页 |
| 3.2.5 常用溶液的配制 | 第53页 |
| 3.3 实验方法 | 第53-57页 |
| 3.3.1 葡萄糖/糠醛组合压力生长测试 | 第53-54页 |
| 3.3.2 平板耐性测试 | 第54页 |
| 3.3.3 酵母胞内ROS水平测定 | 第54-55页 |
| 3.3.4 酵母破碎液蛋白含量的测定 | 第55页 |
| 3.3.5 酵母总RNA提取 | 第55-56页 |
| 3.3.6 反转录及荧光定量PCR | 第56-57页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第57-64页 |
| 3.4.1 FR突变株在葡萄糖/糠醛组合压力下的生长情况 | 第57-60页 |
| 3.4.2 FR突变株对其它抑制物的耐受情况 | 第60-61页 |
| 3.4.3 葡萄糖/糠醛组合压力对酵母胞内ROS水平的影响 | 第61-62页 |
| 3.4.4 irrE基因表达情况 | 第62-63页 |
| 3.4.5 NADPH生成相关基因转录水平的变化 | 第63-64页 |
| 3.5 本章小结 | 第64-66页 |
| 第四章 FR突变株发酵性能的研究 | 第66-74页 |
| 4.1 引言 | 第66页 |
| 4.2 实验材料 | 第66-67页 |
| 4.2.1 菌种 | 第66页 |
| 4.2.2 培养基 | 第66-67页 |
| 4.2.3 主要仪器与统计分析方法 | 第67页 |
| 4.3 实验方法 | 第67-69页 |
| 4.3.1 模拟液发酵试验 | 第67页 |
| 4.3.2 木薯渣酸处理水解 | 第67-68页 |
| 4.3.3 木薯渣水解液生长测试 | 第68页 |
| 4.3.4 木薯渣水解液摇瓶发酵 | 第68-69页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第69-72页 |
| 4.4.1 模拟发酵 | 第69-70页 |
| 4.4.2 木薯渣酸处理水解液糖类及抑制物的含量 | 第70页 |
| 4.4.3 FR突变株在木薯渣水解液中的生长情况 | 第70-71页 |
| 4.4.4 FR突变株在木薯渣水解液中的发酵特性 | 第71-72页 |
| 4.5 本章小结 | 第72-74页 |
| 结论和展望 | 第74-77页 |
| 1.结论 | 第74-75页 |
| 2.创新点 | 第75页 |
| 3.展望 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-86页 |
| 附录 | 第86-87页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 附件 | 第89页 |
