| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-26页 |
| 1.1 动植物乳品真实度检测研发动态 | 第16-19页 |
| 1.1.1 动植物乳品真实度问题的由来 | 第16页 |
| 1.1.2 动植物乳品蛋白掺假检测意义 | 第16-17页 |
| 1.1.3 动植物乳品掺假检测技术及应用 | 第17-19页 |
| 1.1.3.1 反相高效液相色谱(RP-HPLC) | 第17页 |
| 1.1.3.2 高效毛细管电泳(CE) | 第17页 |
| 1.1.3.3 双向凝胶电泳(2-DE) | 第17-18页 |
| 1.1.3.4 酶联免疫吸附法(ELISA) | 第18-19页 |
| 1.2 核桃乳品中核桃蛋白定性定量检测研发动态 | 第19-24页 |
| 1.2.1 核桃乳品掺假检测现状 | 第20-21页 |
| 1.2.1.1 核桃乳品掺假现状分析 | 第20页 |
| 1.2.1.2 核桃乳品掺假检测意义 | 第20-21页 |
| 1.2.2 核桃乳品中蛋白定性定量检测方法 | 第21-24页 |
| 1.2.2.1 聚合酶链式反应(PCR) | 第21-22页 |
| 1.2.2.2 酶联免疫吸附法(ELISA) | 第22-24页 |
| 1.3 研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 1.4 实验技术路线图 | 第25-26页 |
| 第二章 核桃蛋白抗原和两种多克隆抗体的制备 | 第26-48页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 材料 | 第26-31页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第26-27页 |
| 2.2.2 主要材料及试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.2.1 材料 | 第27页 |
| 2.2.2.2 购买试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.3 主要试剂的配制 | 第28-30页 |
| 2.2.3.1 核桃蛋白提取试剂 | 第28页 |
| 2.2.3.2 SDS-PAGE试剂 | 第28-29页 |
| 2.2.3.3 间接ELISA检测方法 | 第29-30页 |
| 2.2.3.4 食物样品抽提缓冲液 | 第30页 |
| 2.2.4 主要仪器设备 | 第30-31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-38页 |
| 2.3.1 抗原的制备 | 第31-32页 |
| 2.3.1.1 脱脂 | 第31页 |
| 2.3.1.2 碱溶 | 第31页 |
| 2.3.1.3 酸沉 | 第31页 |
| 2.3.1.4 纯化 | 第31-32页 |
| 2.3.2 BCA法对抗原进行蛋白定量 | 第32页 |
| 2.3.3 SDS-PAGE对核桃蛋白进行检测 | 第32-33页 |
| 2.3.4 采集阴性血清 | 第33页 |
| 2.3.5 免疫新西兰大白兔 | 第33-34页 |
| 2.3.6 免疫豚鼠 | 第34页 |
| 2.3.7 多克隆抗体的制备 | 第34-35页 |
| 2.3.7.1 兔抗核桃蛋白多克隆抗体的制备 | 第34-35页 |
| 2.3.7.2 豚鼠抗核桃蛋白多克隆抗体的制备 | 第35页 |
| 2.3.8 间接ELISA法检测多克隆抗体效价 | 第35页 |
| 2.3.9 食物原料的处理 | 第35-36页 |
| 2.3.10 多克隆抗体特异性检测 | 第36页 |
| 2.3.11 抗体纯化和HRP标记 | 第36-38页 |
| 2.3.11.1 抗体纯化 | 第36-37页 |
| 2.3.11.2 抗体HRP标记 | 第37-38页 |
| 2.4 实验结果 | 第38-45页 |
| 2.4.1 核桃蛋白定量结果 | 第38页 |
| 2.4.2 抗原(核桃蛋白)电泳结果 | 第38-39页 |
| 2.4.3 多克隆抗体效价检测 | 第39-41页 |
| 2.4.3.1 兔抗核桃蛋白多克隆抗体 | 第39-40页 |
| 2.4.3.2 豚鼠抗核桃蛋白多克隆抗体 | 第40-41页 |
| 2.4.4 多克隆抗体特异性检测 | 第41-43页 |
| 2.4.4.1 兔抗核桃蛋白多克隆抗体 | 第41-42页 |
| 2.4.4.2 豚鼠抗核桃蛋白多克隆抗体 | 第42-43页 |
| 2.4.5 兔多抗纯化结果 | 第43-44页 |
| 2.4.6 HRP抗体标记结果 | 第44-45页 |
| 2.5 讨论 | 第45-46页 |
| 2.6 本章小结 | 第46-48页 |
| 第三章 间接、双抗夹心ELISA方法的建立及条件优化 | 第48-68页 |
| 3.1 引言 | 第48页 |
| 3.2 材料 | 第48-51页 |
| 3.2.1 主要材料及试剂 | 第48-49页 |
| 3.2.1.1 抗原 | 第48页 |
| 3.2.1.2 抗体 | 第48-49页 |
| 3.2.1.3 血清 | 第49页 |
| 3.2.1.4 底物液 | 第49页 |
| 3.2.1.5 HRP羊抗兔二抗 | 第49页 |
| 3.2.1.6 HRP羊抗豚鼠二抗 | 第49页 |
| 3.2.1.7 酶标板 | 第49页 |
| 3.2.2 主要试剂配制 | 第49-50页 |
| 3.2.2.1 ELISA包被液缓冲液 | 第49-50页 |
| 3.2.2.2 ELISA洗涤液(PBST) | 第50页 |
| 3.2.2.3 终止液 | 第50页 |
| 3.2.2.4 封闭液及样品稀释液 | 第50页 |
| 3.2.3 主要仪器设备 | 第50-51页 |
| 3.3 实验方法 | 第51-55页 |
| 3.3.1 间接ELISA法检测方法的程序 | 第51页 |
| 3.3.2 间接ELISA检测方法条件优化 | 第51-52页 |
| 3.3.2.1 抗原和—抗最佳包被浓度的确定 | 第51-52页 |
| 3.3.2.2 二抗最佳工作稀释度的确定 | 第52页 |
| 3.3.2.3 间接ELISA检测方法标准曲线的建立 | 第52页 |
| 3.3.2.4 对建立的间接ELISA法的评价 | 第52页 |
| 3.3.3 夹心ELISA检测方法的程序 | 第52-53页 |
| 3.3.4 夹心ELISA检测方法条件优化 | 第53-54页 |
| 3.3.4.1 包被抗体、抗原最佳反应浓度的确定 | 第53页 |
| 3.3.4.2 酶标抗体最佳工作稀释度的确定 | 第53页 |
| 3.3.4.3 双抗夹心ELISA检测方法标准曲线的建立 | 第53页 |
| 3.3.4.4 对建立的夹心ELISA法的评价 | 第53-54页 |
| 3.3.5 核桃类产品处理方法 | 第54页 |
| 3.3.6 核桃蛋白溶解率、核桃类产品中核桃蛋白成分的测定及掺假比例的计算 | 第54页 |
| 3.3.7 核桃类产品检测 | 第54-55页 |
| 3.3.8 两种ELISA检测方法优缺点分析及最优方法的选择 | 第55页 |
| 3.4 实验结果 | 第55-66页 |
| 3.4.1 间接ELISA：抗原、一抗最佳反应浓度的确定 | 第55-56页 |
| 3.4.2 间接ELISA：二抗最佳工作浓度的确定 | 第56-57页 |
| 3.4.3 间接ELISA法对核桃蛋白定量标准曲线的建立 | 第57-58页 |
| 3.4.4 对建立间接ELISA法的评价 | 第58-59页 |
| 3.4.5 间接ELISA方法检测核桃类产品 | 第59-61页 |
| 3.4.5.1 A品牌核桃粉 | 第59-60页 |
| 3.4.5.2 B品牌核桃乳 | 第60-61页 |
| 3.4.6 夹心ELISA：包被抗体、抗原最佳包被浓度的确定 | 第61页 |
| 3.4.7 夹心ELISA：二抗最佳工作稀释度的确定 | 第61-62页 |
| 3.4.8 夹心ELISA法对核桃蛋白定量标准曲线的建立 | 第62-63页 |
| 3.4.9 对建立夹心ELISA的评价 | 第63-64页 |
| 3.4.10 夹心ELISA方法检测核桃类产品 | 第64-65页 |
| 3.4.10.1 C品牌核桃粉 | 第64-65页 |
| 3.4.10.2 D品牌核桃乳 | 第65页 |
| 3.4.11 两种ELISA检测方法优缺点分析及最优方法的选择. | 第65-66页 |
| 3.5 讨论 | 第66-67页 |
| 3.6 总结 | 第67-68页 |
| 第四章 核桃蛋白试剂盒的组装及初步应用 | 第68-76页 |
| 4.1 引言 | 第68页 |
| 4.2 材料(试剂盒各组分的制备) | 第68-69页 |
| 4.2.1 抗原(标准品) | 第68页 |
| 4.2.2 抗体 | 第68页 |
| 4.2.3 封闭液及样品稀释液 | 第68页 |
| 4.2.4 20×浓缩洗液 | 第68页 |
| 4.2.5 底物液 | 第68-69页 |
| 4.2.6 终止液 | 第69页 |
| 4.2.7 酶联免疫吸附板 | 第69页 |
| 4.3 试剂盒的组装 | 第69页 |
| 4.4 试剂盒说明书 | 第69-72页 |
| 4.5 试剂盒初步应用 | 第72-73页 |
| 4.6 结果 | 第73-74页 |
| 4.6.1 试剂盒的组装 | 第73页 |
| 4.6.2 试剂盒的初步应用 | 第73-74页 |
| 4.7 讨论 | 第74-75页 |
| 4.8 结论 | 第75-76页 |
| 第五章 结论与展望 | 第76-78页 |
| 5.1 结论 | 第76页 |
| 5.2 展望 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第86页 |
| 附录B 攻读硕士期间申请专利目录 | 第86页 |
